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《豬葡萄球菌脫落毒素Exh C基因的克隆及原核表達(dá).pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展。2014，35(9)：34—38ProgressinVeterinaryMedicine豬葡萄球菌脫落毒素ExhC基因的克隆及原核表達(dá)張樂宜，吳堅(jiān)文，蔡汝健，李艷，蔣智勇，劉燕玲，宋長緒(廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物衛(wèi)生研究所／廣東省獸醫(yī)公共衛(wèi)生公共實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510640)摘要：為研究豬葡萄球菌表皮脫毒素ExhC基因的分子特征及其原核表達(dá)產(chǎn)物的免疫學(xué)活性，利用PCR技術(shù)從豬葡萄球菌廣東增城分離株(GDZC株)擴(kuò)增出表皮脫落毒素ExhC基因，測序與序列比較分析顯示，其編碼區(qū)全長為837bp，編碼279個氨基酸，與國內(nèi)外豬葡萄球菌和松鼠葡萄球菌表皮脫落毒素E
2、xhc基因的核苷酸同源性、氨基酸同源性均為100。將ExhC基因克隆于pET一28a(+)表達(dá)載體中，經(jīng)測序正確后，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸埃希茵B(yǎng)L21(DE3)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS_PAGE鑒定和Westernblot分析。表達(dá)的融合蛋白主要以包涵體形式存在，其分子質(zhì)量大小約為32ku，與預(yù)期大小一致。Westernblot分析表明，ExhC重組蛋白能與豬葡萄球菌GDZC株的陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng)，說明表達(dá)的GDZC株ExhC重組蛋白具有良好的免疫學(xué)活性。關(guān)鍵詞：豬葡萄球菌；ExhC基因；原核表達(dá)中圖分類號：Q786文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1007—5038(
3、2014)09—0034—05豬葡萄球菌(S￡口pz0c0ccshyicus)是葡萄球患有乳房炎的奶牛和綿羊的乳汁中都可分離到此菌屬的一個成員，為革蘭陽性球菌，在豬、家禽以及菌。該菌在臨床上可以引起豬群發(fā)生嚴(yán)重的高度接收稿日期：2014-02-11基金項(xiàng)目：廣東省科技廳項(xiàng)目(2O1OAO4O3O101O，2012A020200014，2012A061100006)；2011廣東省主體科研機(jī)構(gòu)創(chuàng)新能力建設(shè)專項(xiàng)(項(xiàng)目資助編號：2011)；廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2o12J41OOO64)；廣東省生豬產(chǎn)業(yè)體系項(xiàng)目(粵農(nóng)2009—380)及廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院院長基金項(xiàng)目(2013
4、13)；科技部農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化資金項(xiàng)目：2013GB2E000352作者簡介：張樂宜(1984一)，男，河南洛陽人，研究實(shí)習(xí)員，碩士研究生，主要從事動物病毒學(xué)研究和豬病臨床診斷工作。*通訊作者IsolationandIdentificationofCoagulaseNegativeJs口pZOcDcchyicusandAnalysisofItsDrugResistanceLIUJin—feng，CHENBing，XIEJiang，BAIAn—bin，MALing，LIANGZhao—qiang。，LIHui。，WUJian—min(1．GuangxiVeterina
5、ryResearchInstitute，Nanning，Guangxi，530001，China；2．NanningBureauofFisheries，AnimalhusbandryandVeterinaryMedicine，Nanning，Guangxi，530001，China；3．NanningAnimalHealthInspection，Nanning，Guangxi，530001，China)Abstract：ToisolateandidentifytheSnZ0c0ccscausingswineendometritisandperformresearch
6、onitspathogenicityanddrugresistanceSOastoprovidethebasisforclinicaluse，astrainofGram—positiveCOCCUSwasisolatedfromtheendometritisliquorpurisofthediseasedswine．Baseonitsmorphologicalandbiochemicalcharacteristicsanimaltrials，thesequenceof16SrRNA，andanalysisofsystemevolutionarytree，itwasi
7、dentifiedascoagulase—negativeS口Z0c0cc5hyicus．Theresultsfromthetestsofdrugsen—sitivityanddrugresistancegenesshowedthatthebacteriaarehighsensitivetoamikacin，doxycycline，pen—icillinandother11kindsofantimicrobials，intermediatesensitivetogentamicin。levofloxacin。vancomycinandother6kindsofa
