豬D型產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌毒素分段基因的原核表達.pdf

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1、廣西農(nóng)業(yè)科學2010,41(6):598-601GuallgxiAgriculturalSciences豬D型產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌毒素分段基因的原核表達黃百花,劉文娟,李志勇,譚春萍,周松峰,譚穎翌,羅佳,陸芹章+(廣西大學動物科學技術(shù)學院,南寧530005)摘要:根撤,enBarrk已發(fā)表的產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌(T.Plll)f0】A基因序列(A腳78)設計1對引物,從豬源D型'PPm中擴增出toxA基因片段(3858bp)。再根據(jù)toxA基因序列設計3對引物,分別擴增出ZQ(1084bp)、ZH(1092bp)、HM(9

2、06bp)3個分段基因,將其克隆至原核表達載體pET32a,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21中進行融合表達。經(jīng)SDS—PAGE和West—emblotting檢測分析,發(fā)r-覓ZQ、HM基因的表達產(chǎn)物以包涵體形式存在,大小分別為75、50kDa,ZH基因不表達。動物試驗結(jié)果表明,HM重組蛋白具有良好的免疫原性、反應原性及一定的生物學活性,而ZQ重組蛋白沒有免疫原性、反應原性及生物學活性。通過間接ELlSA的方法檢測抗毒素的陽性豬血清,結(jié)果表明,HM重組蛋白較天然蛋白具有更高的特異性。關(guān)鍵詞:豬D型產(chǎn)毒素多殺巴氏桿菌;毒素基因;分段;原核

3、表達中圖分類號:$858.28文獻標識碼:A文章編號:1002—8161(2010)06-0598--04Prokaryoticexpressionofsub-toxAgenefortoxigenicPasteurellaMultocidatoxinofswineserotypeDHUANGBai-hua,LIUWen-juan,LIZhi-yong,TANChun—ping,ZHOUSong-feng,TANYing—yi,LUOJia,LUQin-zhang’(CoHegeofAnimalScienceandTechno

4、logy,GuangxiUniversity,Nanning530005,China)Abstract:Apairofprimersw鷦designedusingtoxAgenesequenceoftoxigenicPasteurellamuhocidaf胛m)(Gen—Bank),anda3858bpfragmentWaSamplifiedfromtoxigenicPaSteumllamujtocidawithswineserotypeDusingPCR.WiththetemplateoftoxAgenesequence,

5、threepairsofprimersweredesignedwhichamplified1084bp(ZQ),1092bp(ZH)and906bp(HM)genefragments.neacquiredPCRproductswelt.einsertedintoprokaryoficexpressionpET32a(+),andtrans-formedintoEc格BL21(DE3)‘∞expressioninducedbyIPTG.TheexpressedrecombinantproteinWaSdetectedusing

6、SDS-PAGEandwesternblotting.ItWaSfoundthattheexpressionproductsofZQandHMexistedasinclusionbodywith75and50kDa.whileZHgavenoexpression.MousetestresultsshowedthatHMrecombinantproteinhadgoodimmuno-logicalreactionandbiologicalactivities,whileZQproteinWasfoundwithoutanyac

7、tivity.neantitoxicpositive8erllnlofswinewagdetectedbyindirectELISAmethod.a(chǎn)ndthespecificityoftherecombinantproteinHMWaft,foundtobehigherthanthatofnegativeprotein.ThisstudyprovidesusefuldataforfurtheruseofthePasteurellamtIJtocidatoxin(PMT).Keywords:toxigenicPasteurel

8、lamultocidaofswineserotypeD:sub-toxAgene;fragment;prokaryoticexpression.產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌(ToxingenicPasteurellamuhocida,m1)是引起豬進行性萎縮性鼻炎(Pro.gressiveatro

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