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《牛奶β-酪蛋白和大豆β-伴球蛋白雙抗制備及夾心ELISA快速定性檢測技術(shù)的建立-論文.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版)39(2)：222～226，2013JournalofZhejiangUniversity(Agric．＆LifeSci．)http：／／www．journals．zju．edu．cn／agrE-mail：zdxbnsb@zju．edu．cnDOI：10．3785／j．issn．1008—9209．2012．11．617牛奶酪蛋白和大豆伴球蛋白雙抗制備及夾心ELISA快速定性檢測技術(shù)的建立肖海龍，趙凱，林賽君，王紅青，潘建紅(杭州市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測院，杭州310019)摘要采用牛奶酪蛋
2、白和大豆伴球蛋白分別免疫BALB／c小鼠，4次免疫后，通過脾臟細(xì)胞雜交瘤技術(shù)及間接酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELlSA)篩選制備單克隆抗體，同時分別制備兔抗酪蛋白和伴球蛋白多克隆抗體；通過棋盤滴定法，初步確定單克隆抗體和多克隆抗體的最佳工作濃度，建立雙抗夾心ELlSA用于乳品摻假以及牛奶、大豆過敏原成分的快速定性檢測．結(jié)果表明：通過免疫和雜交瘤技術(shù)分別獲得了抗酪蛋白和p一伴球蛋白的單克隆抗體，純化后2種抗體的效價均達(dá)到1：1×10，通過免疫兔制備的2種多克隆抗體
3、經(jīng)純化后效價在1：2×1O左右；所建立的雙抗夾心ELISA方法的最低檢測限為15ng／mL，與其他物種的蛋白不發(fā)生交叉反應(yīng)，具有良好的特異性．這為建立乳品摻假及過敏原成分快速檢測奠定了基礎(chǔ)．關(guān)鍵詞酪蛋白；3-伴球蛋白；單克隆抗體；酶聯(lián)免疫吸附測定中圖分類號TS252文獻(xiàn)標(biāo)志碼APreparationofdouble-antibodyandestablishmentofsandwichELISAagainstmilkcaseinandsoybean~conglycinin．JournalofZhejiangUniver
4、sity(Agric．&LifeSci．)，2013，39(2)：222—226XIAOHailong，ZHAOKai，LINSaijun，WANGHongqing，PANJianhong(HangzhouInstituteofCalibrationandTestingforQualityandTechnicalSupervision，Hangzhou310019，China)SummaryProteinadulterationandallergensarethetWOmajorfoodsafetyissues，an
5、dcanposehealththreatstoconsumers．Oneoftheeffectiveprecautionsisextensivetest，whichneedssimple，rapidandlow—costtestmethod．Presentmethodsincludingsodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis(SDS-PAGE)，highperformanceliquidchromatography(HPLC)andliquidchro
6、matography-massspectrometry(LC—MS)／MSarenotacceptableforconsumersduetoexpensiveinstruments．ImmunologicaltechniqueisarapidmethodforscreeningandiSsuitableforconsumerstouse．caseinandconglycininarenotonlythemajorproteinsofmilkandsoybean，butalsoimportantfoodborneall
7、ergens．Inthisstudy，themonoclonalantibodiesandpolyclonalantibodiesagainst3-caseinand13-conglycininwerepreparedandtheenzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)kitswereestablishedfordetectingadulterationandallergens．BALB／cmicewereimmunizedfourtimeswithpurifiedantigens
8、addingadjuvantornotuntiltheserumtiterachieved1；1×10．a(chǎn)ndthemicespleencellsandmyelomacellsSP2／Owerefusedastheroutinecell～fusiontechnology．Positivecellswerescreenedfor3-4timesw
