雞沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn).pdf

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1、廣西畜牧獸醫(yī)2011年Vo1．27(4)213雞沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)黃世娟，陳進(jìn)喜’，彭定兵“，翟成兵，鄭彥梓(1．廣西欽州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，欽州535000；2．廣西欽州市動(dòng)物產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心．，欽州535000)中圖分類號(hào)：$855．123．1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1002—5235(2011)04—0213—03雞沙門氏菌病(AvianSalmonellosis)是雞的常板、伊紅美藍(lán)營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，37qc恒溫培養(yǎng)24h。見(jiàn)細(xì)菌性傳染病，由多種沙門氏菌引起的一類傳染觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況及菌落特征，挑選可疑的單個(gè)菌病的總稱。引

2、起禽類發(fā)病的沙門氏菌主要有雞白落劃線接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，37c【=恒溫培養(yǎng)痢沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌及有鞭毛能運(yùn)動(dòng)的多24h。然后將單個(gè)菌落抹片，進(jìn)行革蘭氏染色、顯種副傷寒沙門氏菌-】J。沙門氏菌病導(dǎo)致雞的生產(chǎn)微鏡觀察。性能下降，種蛋的孵化率降低，對(duì)養(yǎng)雞業(yè)造成巨大1．5生化試驗(yàn)的經(jīng)濟(jì)損失。由于抗菌藥物的濫用及不合理使用，挑取以上麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基上無(wú)色小菌使沙門氏菌普遍產(chǎn)生耐藥性，且耐藥譜也越來(lái)越落，作革蘭氏染色，選擇革蘭氏陰性菌落3個(gè)，分別廣’。本試驗(yàn)對(duì)臨床癥狀、病理剖檢變化疑似沙斜面上畫線，于37~C培養(yǎng)24h。用接種針挑取純培門氏菌的

3、病料進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室診斷，對(duì)沙門氏菌進(jìn)行養(yǎng)物接種于包括葡萄糖、甘露醇、蔗糖、乳糖、麥芽分離培養(yǎng)、生化及PCR試驗(yàn)，藥敏試驗(yàn)，為指導(dǎo)養(yǎng)糖、阿拉伯糖、肌醇、鼠李糖、H。S和木糖等生化試雞戶合理用藥，控制和治療沙門氏菌病提供依據(jù)。驗(yàn)管，各接種3管，37c《=培養(yǎng)24h，觀察反應(yīng)情況。1．6PCR擴(kuò)增1材料與方法根據(jù)沙門氏菌invA基因核苷酸序列設(shè)計(jì)引1．1備檢材料物]，由上海生工生物工程公司合成。擴(kuò)增產(chǎn)物發(fā)病死亡疑似沙門氏菌病的2份雛雞病料。長(zhǎng)度為202bp，引物如下：invA—up：5’一CGGT—1．2主要試劑GGGGTlq'GTYGTCq3Trc一3

4、’．invA—dn：5’一麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，ss營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，伊紅TCTCT／q'CCAGTI'CGCTI'CGCC一3’。美蘭營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，氯化鎂孔雀綠增菌液(MM)參照TIANamp病毒基因組DNA／RNA提取試等培養(yǎng)基按常規(guī)方法配制；微量生化發(fā)酵管由上海劑盒方法提取核酸，用上述引物進(jìn)行PCR鑒定，反醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所試劑廠生產(chǎn)；試驗(yàn)藥物紙片購(gòu)自北京天應(yīng)體系總體積25L：內(nèi)含模板2．0ILL，加2×Taq壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司；TIANamp病毒基因組PCRMasterMix12．5IxL，上下游引物(25pmol／lxL)DNA／RNA提取試劑

5、盒為天根生物公司產(chǎn)品。各0．5IxL，加ddH20至25L，置PCR儀中，95~C51．3發(fā)病雞群情況min；94c【=變性45s，54℃退火45s，72c【=延伸60某散養(yǎng)戶購(gòu)人1000只三黃雛雞，未接種任何s，35個(gè)循環(huán)；72cC延伸10min。取PCR產(chǎn)物7疫苗。8日齡時(shí)出現(xiàn)精神不振、食欲減退，9日齡時(shí)在lOg／L瓊脂糖凝膠上電泳，置凝膠成像系統(tǒng)中開始有部分雞死亡。病雞肛門周圍粘附白色糞便，觀察結(jié)果。腹部膨大，剖檢有敗血性變化，肝臟腫大，有點(diǎn)狀出1．7藥敏試驗(yàn)血或灰白色壞死點(diǎn)，腎臟腫大、泄殖腔內(nèi)有白色尿無(wú)菌挑取分離培養(yǎng)的細(xì)菌涂布于營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基

6、，酸鹽，膽囊充盈，有的脾臟腫大，質(zhì)地脆弱。待稍干后，將各種抗生素藥敏紙片平貼于培養(yǎng)基表1．4細(xì)菌分離與培養(yǎng)面，放入培養(yǎng)箱中37~C培養(yǎng)24h后，觀察、測(cè)定抑剖檢病死雞，取肝、脾、腸腔內(nèi)容物無(wú)菌接種到菌圈的直徑。判定標(biāo)準(zhǔn)J：抑菌圈直徑在15mm以MM營(yíng)養(yǎng)肉湯中，于37℃增菌培養(yǎng)24h。取增菌液分別接種于麥康凱營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板、SS營(yíng)養(yǎng)瓊脂平上為高度敏感(青霉素高敏為20mm以上)；10～15mm為中度敏感；10ram以下為低度敏感，無(wú)抑{通訊作者，E—mail：qz2108898@163．corn。菌圈為不敏感。214廣西畜牧獸醫(yī)2011年Vo1．27

7、(4)取單個(gè)菌落涂片、革蘭氏染色、鏡檢，視野中發(fā)2結(jié)果現(xiàn)大量紅色、兩端鈍圓的革蘭氏陰性短小桿菌，單2．1分離培養(yǎng)結(jié)果個(gè)、成對(duì)或成叢分布，形態(tài)均一，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜。病料采集經(jīng)培養(yǎng)基24h培養(yǎng)后，在ss瓊脂平2．3生化試驗(yàn)結(jié)果板培養(yǎng)基上可觀察到無(wú)色半透明菌落，部分菌落中將營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基平皿上的單個(gè)沙門氏菌菌落分間帶黑色。在麥康凱培養(yǎng)基上觀察到菌落呈透明、別接種于生化培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h。生化試驗(yàn)無(wú)色、圓形凸起、濕潤(rùn)，直徑為1mm一2mm。結(jié)果符合沙門氏菌的特性(見(jiàn)表1)，從而證明分2．2染色及形態(tài)觀察離菌均為沙門氏菌，命名為sl，S2。表1生化特性

8、試驗(yàn)結(jié)果注：“+”表示產(chǎn)酸或陽(yáng)性；“o”表示產(chǎn)氣；“一”表示陰性。2．4PCR鑒定結(jié)果2．5藥敏試驗(yàn)結(jié)果用PCR擴(kuò)增得到一條長(zhǎng)約202b