熒光定量PCR技術臨床應用課件.ppt

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1、熒光定量PCR技術在臨床 醫(yī)學研究中的應用及注意事項內容提要一、基因診斷技術在醫(yī)學檢驗中的地位二、熒光探針定量PCR在臨床醫(yī)學中的應用三、熒光探針定量PCR在臨床醫(yī)學中的主要問題基因診斷的物質基礎及與其它 診斷方法的區(qū)別基因診斷免疫學診斷臨床診斷細胞膜細胞核DNA轉錄mRNA翻譯蛋白質臨床表現生化診斷臨床實驗醫(yī)學發(fā)展三個時代標志技術性質生化診斷時代生化分析表象免疫學診斷時代酶免、放免表象分子(基因)診斷時代基因體外擴增(PCR)本質1、病原體的定量檢測及藥物療效考評(HBV)2、腫瘤基因和腫瘤標志物表達(mR

2、NA)的檢測(P53)3、遺傳病基因的檢測(地中海貧血)4、與疾病相關的各種蛋白質的基因表達的定量檢測6、建立病原體的分子診斷標準熒光定量PCR在臨床醫(yī)學中的應用熒光定量PCR在病原體檢測中的應用一、肝炎病毒定量檢測二、性病病原體檢測三、優(yōu)生優(yōu)育相關項目檢測四、結核桿菌及呼吸道病原體檢測五、其他病原體檢測病毒性肝炎概況病毒性肝炎是由多種肝炎病毒引起,以肝臟炎癥和壞死病變?yōu)橹鞯囊唤M傳染病。按病毒的生物學特征、臨床和流行病學特征,1989年在日本東京的國際肝炎學術討論會上,將其分為甲(A)型、乙(B)型、(C)型

3、、?。―)型、戊(E)型肝炎,以后還報道了己(F)型和庚(G)型。我國是個肝炎大國,病毒性肝炎發(fā)病數位居法定管理傳染病的第一位,僅乙型肝炎病毒感染者就達1.2億,每年新增加的感染者也在百萬以上,丙肝發(fā)病率亦趨上升。慢性乙型肝炎病程遷延,如得不到及時的治療,部分將會發(fā)展為肝硬化甚至肝癌,嚴重危害人類健康。HBV基因型與血清型關系及流行病學分布基因型血清學亞型基因長度(nt)臨床突變率主要流行地域PC*(G1896A)BCP**(1762/1764)Badw2ayw1321550%(常)T185816%東南亞、中

4、國、日本Cayr;adrq+;Adrq-;adr;adw2321550%(常)T1858或C185858%(常)東南亞、中國、日本、澳洲、美國病原學乙型肝炎檢測標志物HBsAg,抗-HBsHBeAg,抗-Hbe抗HBcHBV-DNA乙型肝炎免疫檢測和PCR結果異同“大三陽”PCR結果陰性抗-HBs陽性,PCR結果陽性熒光定量PCR技術對性傳播疾病的檢測一、淋球菌(NGH)二、沙眼衣原體、解脲脲原體(CT、UU)(有證)三、梅毒螺旋體(TP)四、單純庖疹病毒(HSV)五、乳頭瘤病毒(HPV)(有證)六、人類免疫

5、缺陷病毒(HIV)PCR技術對性傳播疾病檢測的注意事項1標本的選取TPHSV2臨床療效考評超高倍熒光定量PCR診斷TORCH綜合征傳統(tǒng)的TORCH病原體:TOX,other,RV,CMV,HSV新近發(fā)現的TORCH:麻疹V、腮腺炎V、水痘—帶狀庖疹V、腸道V、乙肝V、丙肝V、HPV、EBV、HIV、人庖疹V6、人微小病毒B19等TORCH感染的實驗室診斷一、組織培養(yǎng):慢,費力,陽性率低二、血清學診斷:IgG:IgM:1、不能定量分析2、抗體的產生受多種因素的影響3、產生假陽性三、基因診斷方法原理:檢測TORC

6、H病原體的核酸優(yōu)點:1、客觀指標2、敏感性、特異性高3、定量指標熒光定量PCR在TORCH診斷中的應用:1、篩選TORCH的患者2、建立TORCH的分子診斷標準熒光定量PCR技術檢測TOX孕婦TOX感染的危害孕早期(<3月)25%感染胎兒,后期65%感染胎兒但早期感染危害嚴重易感人群1、吃生或未熟的含有囊蟲或囊蟲卵的肉類2、從事動物尸體、皮毛等工作孕婦3、飼養(yǎng)寵物,如貓、狗者熒光定量PCR技術檢測HCMV人群自然感染率達到60—80%,可通過胎盤、產道、母乳傳染初次感染HCMV的孕婦傳染胎兒的危險性15——5

7、0%再次感染僅為0.5%—2.5%注意事項缺乏分子診斷標準輔助指標熒光定量PCR技術檢測21三體綜合征孕婦外周血中有胎兒的少量細胞通過PCR技術檢測孕婦外周血中的胎兒細胞熒光定量PCR技術用于性別鑒定熒光定量PCR檢測SRY基因SRY基因,雄性的性別決定基因,指Y染色體上具體決定生物雄性性別的基因片段科研應用不提供商業(yè)試劑EB病毒載量與鼻咽癌血漿EBV載量與鼻咽癌顯著相關鼻咽癌病人血漿EBV與腫瘤復發(fā)相關10個復發(fā)病人:32,250copies/ml15個二年持續(xù)緩解病人:0copies/ml17個隨訪病人:

8、臨床惡化前6月顯著升高熒光定量PCR技術用于肺部感染的診斷一、肺炎支原體的檢測二、結核桿菌的檢測意義:1、快速診斷2、治療方案與細菌感染的治療方案不同地中海貧血海洋性貧血又稱地中海貧血(Thalassemia)。是一組遺傳性溶血性貧血。其共同特點是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成。導致血紅蛋白的組成成分改變,本組疾病的臨床癥狀輕重不一,大多表現為慢性進行性溶

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