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《熒光定量PCR技術(shù)臨床應(yīng)用課件.ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、熒光定量PCR技術(shù)在臨床 醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用及注意事項(xiàng)內(nèi)容提要一、基因診斷技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的地位二、熒光探針定量PCR在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用三、熒光探針定量PCR在臨床醫(yī)學(xué)中的主要問題基因診斷的物質(zhì)基礎(chǔ)及與其它 診斷方法的區(qū)別基因診斷免疫學(xué)診斷臨床診斷細(xì)胞膜細(xì)胞核DNA轉(zhuǎn)錄mRNA翻譯蛋白質(zhì)臨床表現(xiàn)生化診斷臨床實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)發(fā)展三個(gè)時(shí)代標(biāo)志技術(shù)性質(zhì)生化診斷時(shí)代生化分析表象免疫學(xué)診斷時(shí)代酶免、放免表象分子(基因)診斷時(shí)代基因體外擴(kuò)增(PCR)本質(zhì)1、病原體的定量檢測(cè)及藥物療效考評(píng)（HBV）2、腫瘤基因和腫瘤標(biāo)志物表達(dá)(mR
2、NA)的檢測(cè)（P53）3、遺傳病基因的檢測(cè)（地中海貧血）4、與疾病相關(guān)的各種蛋白質(zhì)的基因表達(dá)的定量檢測(cè)6、建立病原體的分子診斷標(biāo)準(zhǔn)熒光定量PCR在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用熒光定量PCR在病原體檢測(cè)中的應(yīng)用一、肝炎病毒定量檢測(cè)二、性病病原體檢測(cè)三、優(yōu)生優(yōu)育相關(guān)項(xiàng)目檢測(cè)四、結(jié)核桿菌及呼吸道病原體檢測(cè)五、其他病原體檢測(cè)病毒性肝炎概況病毒性肝炎是由多種肝炎病毒引起，以肝臟炎癥和壞死病變?yōu)橹鞯囊唤M傳染病。按病毒的生物學(xué)特征、臨床和流行病學(xué)特征，1989年在日本東京的國(guó)際肝炎學(xué)術(shù)討論會(huì)上，將其分為甲（A）型、乙（B）型、（C）型
3、、?。―）型、戊（E）型肝炎，以后還報(bào)道了己（F）型和庚（G）型。我國(guó)是個(gè)肝炎大國(guó)，病毒性肝炎發(fā)病數(shù)位居法定管理傳染病的第一位，僅乙型肝炎病毒感染者就達(dá)1.2億，每年新增加的感染者也在百萬以上，丙肝發(fā)病率亦趨上升。慢性乙型肝炎病程遷延，如得不到及時(shí)的治療，部分將會(huì)發(fā)展為肝硬化甚至肝癌，嚴(yán)重危害人類健康。HBV基因型與血清型關(guān)系及流行病學(xué)分布基因型血清學(xué)亞型基因長(zhǎng)度(nt)臨床突變率主要流行地域PC*(G1896A)BCP**(1762/1764)Badw2ayw1321550％（常）T185816％東南亞、中
4、國(guó)、日本Cayr;adrq+;Adrq-;adr;adw2321550％（常）T1858或C185858％（常）東南亞、中國(guó)、日本、澳洲、美國(guó)病原學(xué)乙型肝炎檢測(cè)標(biāo)志物HBsAg，抗-HBsHBeAg，抗-Hbe抗HBcHBV-DNA乙型肝炎免疫檢測(cè)和PCR結(jié)果異同“大三陽(yáng)”PCR結(jié)果陰性抗-HBs陽(yáng)性，PCR結(jié)果陽(yáng)性熒光定量PCR技術(shù)對(duì)性傳播疾病的檢測(cè)一、淋球菌（NGH）二、沙眼衣原體、解脲脲原體（CT、UU）(有證）三、梅毒螺旋體（TP）四、單純庖疹病毒（HSV）五、乳頭瘤病毒（HPV）（有證）六、人類免疫
5、缺陷病毒（HIV）PCR技術(shù)對(duì)性傳播疾病檢測(cè)的注意事項(xiàng)1標(biāo)本的選取TPHSV2臨床療效考評(píng)超高倍熒光定量PCR診斷TORCH綜合征傳統(tǒng)的TORCH病原體：TOX,other,RV,CMV,HSV新近發(fā)現(xiàn)的TORCH：麻疹V、腮腺炎V、水痘—帶狀庖疹V、腸道V、乙肝V、丙肝V、HPV、EBV、HIV、人庖疹V6、人微小病毒B19等TORCH感染的實(shí)驗(yàn)室診斷一、組織培養(yǎng)：慢，費(fèi)力，陽(yáng)性率低二、血清學(xué)診斷：IgG：IgM：1、不能定量分析2、抗體的產(chǎn)生受多種因素的影響3、產(chǎn)生假陽(yáng)性三、基因診斷方法原理：檢測(cè)TORC
6、H病原體的核酸優(yōu)點(diǎn)：1、客觀指標(biāo)2、敏感性、特異性高3、定量指標(biāo)熒光定量PCR在TORCH診斷中的應(yīng)用：1、篩選TORCH的患者2、建立TORCH的分子診斷標(biāo)準(zhǔn)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)TOX孕婦TOX感染的危害孕早期（<3月）25%感染胎兒，后期65%感染胎兒但早期感染危害嚴(yán)重易感人群1、吃生或未熟的含有囊蟲或囊蟲卵的肉類2、從事動(dòng)物尸體、皮毛等工作孕婦3、飼養(yǎng)寵物，如貓、狗者熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)HCMV人群自然感染率達(dá)到60—80%，可通過胎盤、產(chǎn)道、母乳傳染初次感染HCMV的孕婦傳染胎兒的危險(xiǎn)性15——5
7、0%再次感染僅為0.5%—2.5%注意事項(xiàng)缺乏分子診斷標(biāo)準(zhǔn)輔助指標(biāo)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)21三體綜合征孕婦外周血中有胎兒的少量細(xì)胞通過PCR技術(shù)檢測(cè)孕婦外周血中的胎兒細(xì)胞熒光定量PCR技術(shù)用于性別鑒定熒光定量PCR檢測(cè)SRY基因SRY基因，雄性的性別決定基因，指Y染色體上具體決定生物雄性性別的基因片段科研應(yīng)用不提供商業(yè)試劑EB病毒載量與鼻咽癌血漿EBV載量與鼻咽癌顯著相關(guān)鼻咽癌病人血漿EBV與腫瘤復(fù)發(fā)相關(guān)10個(gè)復(fù)發(fā)病人：32，250copies/ml15個(gè)二年持續(xù)緩解病人：0copies/ml17個(gè)隨訪病人：
8、臨床惡化前6月顯著升高熒光定量PCR技術(shù)用于肺部感染的診斷一、肺炎支原體的檢測(cè)二、結(jié)核桿菌的檢測(cè)意義：1、快速診斷2、治療方案與細(xì)菌感染的治療方案不同地中海貧血海洋性貧血又稱地中海貧血（Thalassemia）。是一組遺傳性溶血性貧血。其共同特點(diǎn)是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成。導(dǎo)致血紅蛋白的組成成分改變，本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶
