復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂膠囊水提液絮凝澄清工藝研究

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1、復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂膠囊水提液絮凝澄清工藝研究【關(guān)鍵詞】復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂膠囊;殼聚糖;澄清工藝　復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂膠囊為多年臨床經(jīng)驗(yàn)方，用于高脂血癥及脂代謝紊亂相關(guān)疾病的治療，療效顯著，已獲國(guó)家發(fā)明專利。該方由丹參、白術(shù)、佛手等中藥組成，具有健脾益腎、舒肝化痰、理氣涼血、祛瘀解毒之功效。前期研究結(jié)果顯示，丹參、白術(shù)、佛手中水溶性組分具有調(diào)節(jié)血脂，抗脂質(zhì)過(guò)氧化，抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用[1～3]。因此，丹參、白術(shù)、佛手等藥材以水為提取溶劑進(jìn)行提取，但在有效成分被提取出的同時(shí)，大量水溶性雜質(zhì)也被提出。為去除雜質(zhì)，富集有效成分，提高制劑的穩(wěn)定性，

2、在前期實(shí)驗(yàn)研究確定采用殼聚糖絮凝法精制的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步采用正交實(shí)驗(yàn)法，以丹酚酸B、總酚酸、總多糖含量及總固體得率為指標(biāo)，優(yōu)選最佳的絮凝澄清精制工藝條件。　　1儀器與試藥　　DIONEXultimate3000(德國(guó));UV-1101型分光光度計(jì)(上海天美);RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海嘉鵬科技有限公司);BS423S型電子分析天平(北京賽多利斯);KQ-250型醫(yī)用超聲波清洗機(jī)(昆山超聲儀器有限公司，功率250)濾過(guò)，濃縮，定容至3000ml，作為樣品溶液?！　?.2殼聚糖絮凝劑的制備稱取殼聚糖1g，加入2%的

3、醋酸溶液100ml，攪拌，靜置24h，攪拌均勻，配制成1%的溶液?！　?.3精制工藝實(shí)驗(yàn)根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選出殼聚糖用量、藥液濃度、pH值3個(gè)試驗(yàn)因素，每因素3水平(見(jiàn)表1)。按L9(34)正交實(shí)驗(yàn)表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)安排，在一定溫度(50℃)下，加入殼聚糖絮凝劑，攪勻(50r·min-1)，靜置，離心，取上清液，定容，作為樣品溶液。分別測(cè)定各樣品溶液中總多糖、總酚酸、丹酚酸B的含量及總固體得率。表1因素水平　　2.4總多糖含量測(cè)定　　2.4.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖0.0556g，加水溶解并定容50m

4、l量瓶中，制成每毫升含1.112mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml至50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密吸取上述各濃度溶液2ml，分別加入2%苯酚溶液1ml，搖勻，迅速加入濃硫酸5ml，搖勻，靜置5min，至沸水浴中加熱15min，取出，快速用冷水冷卻至室溫。以水為空白，同樣顯色操作制備空白對(duì)照，于紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)490nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度。以葡萄糖毫克數(shù)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=2.8122X+0.1406，r=0.9993。葡萄糖

5、在0.02224～0.13344mg范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系?！　?.4.2供試品溶液制備分別精密量取各正交實(shí)驗(yàn)所得濃縮液各100ml，加乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置，濾過(guò)，濾渣分別用無(wú)水乙醇、丙酮洗滌，干燥，加水溶解并定容至25ml，作為供試品溶液?！　?.4.3穩(wěn)定性考察精密量取供試品溶液100μl，置25ml刻度試管中，按“2.4.1”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定吸光度，然后每隔30min測(cè)定1次(n=6)，150min內(nèi)吸光度基本不變，表明供試品在150min內(nèi)基本穩(wěn)定?！　?.4.4含量測(cè)定精密量取各供試品溶液100

6、μl，置25ml試管中，按“2.4.1”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算總多糖的含量。結(jié)果見(jiàn)表2?！　?.5總酚酸測(cè)定　　2.5.1原兒茶醛標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取原兒茶醛對(duì)照品0.01422g于25ml量瓶中，加水溶解定容至刻度，搖勻，即得。分別吸取原兒茶醛對(duì)照品溶液0.5，1，1.2，1.5，2ml于20ml量瓶中，分別加入0.5%亞硝酸鈉溶液5ml，搖勻，放置12min后，加入10%硝酸鋁溶液0.5ml，搖勻，放置12min后，加入1mol·L-1氫氧化鈉溶液5.0ml，加水稀釋至刻度，搖勻，10min后，用紫外可見(jiàn)

7、分光光度計(jì)于490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度[4]，以原兒茶醛毫克數(shù)對(duì)吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果原兒茶醛在0.2844～1.1376mg范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系，回歸方程為：Y=0.9314X-0.0666，r=0.9988?！　?.5.2穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密量取供試品溶液于20ml量瓶中，按“2.5.1”項(xiàng)下方法操作，每間隔10min測(cè)定1次，測(cè)定結(jié)果表明，顯色后60min內(nèi)供試品基本穩(wěn)定?！　?.5.3含量測(cè)定精密量取各供試品溶液100μl，置25ml刻度試管中，按“2.5.1”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算總酚酸含量。結(jié)果

8、見(jiàn)表2?！　?.6丹酚酸B含量測(cè)定　　2.6.1色譜條件與系統(tǒng)試用性色譜柱KromasilC18(5μm，250mm×4.6mm);流動(dòng)相甲醇-乙腈-0.1%甲酸(24∶10∶66);流速1ml·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)286nm;進(jìn)樣10μl。　　2.6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密稱取丹酚酸B對(duì)照品0.011590g，加75%甲醇制成每毫升