利用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性dna技術(shù)分析刺五加的遺傳多樣性

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1、利用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA技術(shù)分析刺五加的遺傳多樣性作者：邢朝斌，勞鳳云，吳鵬，李玉彥，沈海龍【摘要】　　目的從DNA水平對(duì)收集的4個(gè)產(chǎn)地的刺五加進(jìn)行遺傳多樣性分析，為更好地開(kāi)發(fā)利用刺五加資源奠定基礎(chǔ)。方法隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（RAPD）技術(shù)分析遺傳多樣性，UPGMA進(jìn)行聚類分析。結(jié)果10個(gè)隨機(jī)引物擴(kuò)增得到72條片段，多態(tài)性位點(diǎn)比率為88.89％。不同產(chǎn)地間的遺傳相似系數(shù)在0.4693～0.7851之間，均值為0.6293，同一產(chǎn)地不同居群間的遺傳相似系數(shù)在0.5630～0.9542之間，均值為0.7644。不同產(chǎn)地刺五加之間的遺傳多樣性高于同一產(chǎn)地不同居群的個(gè)體，其

2、中產(chǎn)地穆棱的刺五加與產(chǎn)地和龍、本溪、尚志之間的相似性較低，單成一支。產(chǎn)地之間的相似性與地理距離呈不完全相關(guān)性。結(jié)論刺五加種群內(nèi)部具有較高的遺傳多樣性，利用RAPD技術(shù)分析刺五加的遺傳多樣性是可行的?！娟P(guān)鍵詞】刺五加遺傳多樣性擴(kuò)增多態(tài)性DNA　　Abstract：ObjectiveInordertodevelopandutilizetheresourceofEleutherococcussenticosus,thegeicdiversityofEleutherococcussenticosusfromfourhabitatsilarity,thenclusterana

3、lysisethod.ResultsTenrandomprimersgenerated72bands(rateofpolymorphicbandsilarityindexamongdifferenthabitatseanvalueilarityindexamongdifferentpopulationsofEleutherococcussenticosusfromthesamehabitateanvaluedifferenthabitatsdifferentpopulationsgroehabitatandthesimilarityofEleutherococcus

4、senticosusfromMulingseparatedotherhabitatsfromHelong,BenxiandShangzhi.TheresultsalsoshoilarityamonghabitatsentdifferenthabitatsbyRAPD.　　Key），并進(jìn)行日常管理與維護(hù)。表1植物材料來(lái)源（略）　　1.2總DNA的提取利用Tiangen公司植物基因組DNA提取試劑盒提取新鮮葉片的基因組DNA，將準(zhǔn)備好的DNA溶于適量的TE緩沖液，用分光光度法測(cè)定DNA的濃度和純度，并將其調(diào)整為20μg/μl?！　?.3RAPD產(chǎn)物及檢測(cè)從40個(gè)RAPD

5、隨機(jī)引物中選取了10個(gè)多態(tài)性高、重復(fù)性好的引物(見(jiàn)表2)，在4個(gè)產(chǎn)地10個(gè)居群間進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系如下：25μl體系中包括模板DNA100ng，引物100ng，Taq酶1U，含(NH4)2SO4的10×buffer2.5μl［750mmol/LTris-HCl（pH8.8），200mmol/L(NH4)2SO4，0.1%Tmol/L的MgCl22.5μl，在PTC-100TMPCR儀上進(jìn)行，程序如下：94℃預(yù)變性2min，然后進(jìn)行以下40個(gè)循環(huán)：94℃30s，40℃30s，72℃1min，最后72℃延伸5min。反應(yīng)產(chǎn)物在1.5％瓊脂糖膠上檢測(cè)，電壓4V/cm

6、，電泳50min，用BIO-RADGelDoc2000凝膠成像系統(tǒng)記錄拍照。用λDNAHindⅢ作分子量對(duì)照。表2所用引物及擴(kuò)增結(jié)果（略）　　1.4數(shù)據(jù)分析利用CrossChecker軟件，按瓊脂糖凝膠同一位置上DNA電泳條帶的有無(wú)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，有帶的標(biāo)記為“1”，無(wú)帶的標(biāo)記為“0”，獲得1、0數(shù)據(jù)矩陣。應(yīng)用POPGENE32軟件進(jìn)行UPGMA（Pairgroupmethodusingarithmetic）聚類分析?！　?結(jié)果　　2.1刺五加遺傳多樣性分析結(jié)果從40個(gè)隨機(jī)引物（10堿基的寡核苷酸）中篩選出的10個(gè)能得到清晰擴(kuò)增譜帶且產(chǎn)生多態(tài)性的隨機(jī)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。共

7、擴(kuò)增出72個(gè)可區(qū)分的位點(diǎn)，主要集中在200～2000bp之間，其中64個(gè)表現(xiàn)出多態(tài)性，多態(tài)性比例高達(dá)88.89％，平均每個(gè)引物產(chǎn)生7.2個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)6.4個(gè)。4個(gè)產(chǎn)地刺五加的多態(tài)性位點(diǎn)比例大小依次為：尚志>和龍>本溪>穆棱（見(jiàn)表3）。擴(kuò)增結(jié)果見(jiàn)圖1。　　由NEi指數(shù)估算的基因多樣性結(jié)果與多態(tài)性位點(diǎn)比例大小順序相同（見(jiàn)表3）。由POPGENE32算出的總居群基因多樣度（Ht）、居群內(nèi)基因多樣度（Hs）和基因分化系數(shù)（Gst）在4個(gè)產(chǎn)地10居群上分別為：0.4529，0.1794，0.6039；在產(chǎn)地和龍7個(gè)居群上分別為：0.3594，0