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《復(fù)方血栓通膠囊微生物限度檢查法驗(yàn)證》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、復(fù)方血栓通膠囊微生物限度檢查法驗(yàn)證【摘要】目的建立復(fù)方血栓通膠囊微生物限度檢查方法。方法采用《中國(guó)藥典》(2010年版)一部微生物限度檢查法對(duì)復(fù)方血栓通膠囊微生物限度檢查進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果復(fù)方血栓通膠囊對(duì)金黃色葡萄球菌,枯草芽孢桿菌有抑制作用,不適宜采用平皿法檢查。因此選擇用培養(yǎng)基稀釋法消除其抑菌活性。結(jié)論本品細(xì)菌數(shù)檢查可用培養(yǎng)基稀釋法；霉菌和酵母菌數(shù)可用常規(guī)法；大腸埃希菌檢查可常規(guī)法進(jìn)行檢測(cè)?！娟P(guān)鍵詞】復(fù)方血栓通膠囊；微生物限度；抑菌活性；培養(yǎng)基稀釋法復(fù)方血栓通膠囊是國(guó)家火炬計(jì)劃重大項(xiàng)目的成果，是全國(guó)為數(shù)不多的單品種年銷售數(shù)億元的中成藥。復(fù)方血栓通膠囊由三七、黃芪、丹參、玄
2、參經(jīng)科學(xué)方法提取有效成分制成；功效活血化瘀,益氣養(yǎng)陰；用于血瘀兼氣陰兩虛證的視網(wǎng)膜靜脈阻塞、穩(wěn)定性勞累型心絞痛等。由于功效顯著，應(yīng)用廣泛，被載入《中國(guó)藥典》。復(fù)方血栓通膠囊為不含原藥粉的口服制劑，微生物限度檢查包括細(xì)菌、霉菌和酵母菌、控制菌中的大腸埃希菌。為了保證用藥安全，確立可靠的微生物限度檢驗(yàn)方法，作者按照《中國(guó)藥典》微生物限度檢查方法［1］規(guī)定，對(duì)該品的微生物限度的檢查法進(jìn)行了驗(yàn)證?，F(xiàn)報(bào)告如下。71實(shí)驗(yàn)材料1.1儀器及樣品JYT-2架盤(pán)天平，LRH-150B型生化培養(yǎng)箱，隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱，MLS-3750高壓蒸汽滅菌器，潔凈工作臺(tái)，三角瓶，培養(yǎng)皿等。復(fù)方血栓通膠
3、囊(廣東眾生藥業(yè)股份有限公司100901101001101201)1.2培養(yǎng)基稀釋劑及試劑營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基,玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基,改良馬丁培養(yǎng)基,營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,膽鹽乳糖培養(yǎng)基和和對(duì)照培養(yǎng)基，4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基,麥康凱瓊脂培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基，pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液等,均來(lái)源于中國(guó)生物制品檢定所。1.3試驗(yàn)用菌種大腸埃希菌(Escherichiacoli)［CMCC(B)44102］,金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)［CMCC(B)26003］,枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)［
4、CMCC(B)63501］,白色念珠菌(Candidaalbicans)［CMCC(F)98001］，以上菌種均來(lái)源于中國(guó)生物制品檢定所,黑曲霉(Aspermlillusnimler)［CMCC(F)98003］菌種來(lái)源于廣東省藥品檢驗(yàn)所。所有菌種均為不超5代的菌株。2方法和結(jié)果2.1細(xì)菌、霉菌及酵母菌檢查法的驗(yàn)證72.1.1菌液的制備接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18~24h；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24~48h。上述培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋制成每1ml含菌數(shù)約為50~100cfu的菌
5、懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5d，加入5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)50~100cfu的孢子懸液，備用。2.1.2供試液的制備取樣品10g，置已滅菌的三角瓶中,分別加入pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml,混合均勻,制成1?∶?10的樣品稀釋液。平皿法直接取稀釋液為供試液。2.1.3培養(yǎng)基的適用性檢查按照《中國(guó)藥典》(2010版)相關(guān)規(guī)定檢查，培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不
6、小于對(duì)照的菌落平均數(shù)的70%，形態(tài)大小與對(duì)照的一致，判定培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。2.1.4驗(yàn)證方法2.1.4.1平皿(常規(guī))法2.1.4.1.1試驗(yàn)組取供試液1ml和50~100cfu的試驗(yàn)菌各1ml,分別注入平皿中7立即傾注相應(yīng)瓊脂培養(yǎng)基,每株試驗(yàn)菌平行制備2份，按平皿法測(cè)定其菌數(shù)。2.1.4.1.2試驗(yàn)菌液組取已制備好含50~100cfu的試驗(yàn)菌液各1ml分別注入平皿中，加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的試驗(yàn)平皿立即傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，30~35℃培養(yǎng)3d，計(jì)數(shù)；加入白色念珠菌、黑曲霉的試驗(yàn)平皿傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基。23~28℃培養(yǎng)5d，計(jì)數(shù)。每株試
7、驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定其菌數(shù)。2.1.4.1.3供試品對(duì)照組取供試液1ml注入平皿中,立即傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基15~20ml,每種培養(yǎng)基平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定其菌數(shù)。2.1.4.2培養(yǎng)基稀釋法2.1.4.2.1試驗(yàn)組取供試液1ml分別等量注入五個(gè)平皿中，并分別加入50~100cfu的試驗(yàn)菌各1ml,立即傾注相應(yīng)瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2份，按培養(yǎng)基稀釋法測(cè)定其菌數(shù)。2.1.4.2.2試驗(yàn)菌液組取已制備好含50~100cfu的試驗(yàn)菌液各1ml分別注入平皿中，加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球
