dats通過nf-κb抑制lps誘導(dǎo)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞促炎細(xì)胞因子表達(dá)

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1、DATS通過NF-κB抑制LPS誘導(dǎo)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞促炎細(xì)胞因子表達(dá)?1580?,中國藥理學(xué)通報ChinesePharmacologicalBulletin2007Dec;23(12):1580-4DATS通過NF.KB抑制LPS誘導(dǎo)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞促炎細(xì)胞因子表達(dá)朱桂軍,李淑瑾,胡振杰,于占彪,張玉想,張勇(1,河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院ICU,河北石家莊050011;2,河北醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)系,河北石家莊050017;3.河北大學(xué)附屬醫(yī)院ICU,河北保定071000)中國圖書分類號:R一332;R284.1;R329.24;R341,31;R392.11;R563;R977,6文獻標(biāo)識碼:A

2、文章編號:1001—1978(2007)l2—1580一o5摘要:目的探討二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)誘導(dǎo)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞腫瘤壞死因子(TNF—d)及白介素一l13表達(dá)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制.方法體外培養(yǎng)MH—S細(xì)胞,用DATS和(或)LPS進行干預(yù).反轉(zhuǎn)錄PCR檢測細(xì)胞中TNF-d,IL—l13mRNA表達(dá),電泳遷移率改變分析(EMSA)檢測細(xì)胞核因子一KB(NF—KB)活性,Westernblot檢測細(xì)胞磷酸化(P—IKB)及非磷酸化IKB的表達(dá).結(jié)果LPS刺激MH—S細(xì)胞可導(dǎo)致TNF_d,IL—l13mRNA,p-I~B表達(dá)增加及NF—KB活性升高.用DATS(0.1,0,

3、5,2.5,5.0mg?L)預(yù)處理細(xì)胞3Omin后再給予LPS刺激,可使TNF-d,IL—l13mRNA表達(dá)降低,并呈劑量依賴性;升高的NF—KB活性及p-I~B表達(dá)均顯不同程度的抑制.單獨DATS對TNF—d,IL—l13mRNA表達(dá)及NF—KB活性無影響.結(jié)論DATS可通過抑制IKB磷酸化及NF—KB活化,進而下調(diào)LPS誘導(dǎo)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞TNF—d,IL—l13mRNA表達(dá).關(guān)鍵詞:二烯丙基三硫;脂多糖;肺泡巨噬細(xì)胞;細(xì)胞因子;核因子一KB二烯丙基三硫(diallyltrisulfide,DATS)是大蒜提取物的主要有效成分,具有多種藥理作用,如抑制血小板聚集從而預(yù)防動脈粥樣硬化,

4、抑制癌細(xì)胞增生促進癌細(xì)胞凋亡,抗氧化作用等¨J.我們前期研究表明,DATS可減輕脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的急性肺損傷(acutelunginjury,Au)小鼠肺組織炎癥反應(yīng)及肺水腫程度,對血清及肺組織中的腫瘤壞死因子一Ot(tumornecrosisfactor—,TNF—)及白介素一1B(interleukin一1B,IL一1B)的生成具有抑制作用HJ,并可下調(diào)LPS誘導(dǎo)的小鼠肺泡巨噬細(xì)收稿日期:2007—07—12,修回日期:2007—10—08基金項目:河北省科技攻關(guān)資助項目(No05276101D-65)作者簡介:朱桂軍(1972一),男,博士

5、,副主任醫(yī)師,碩士生導(dǎo)師,E-mail:guijunl0@sina.com;胡振杰(1964一),男,博士,主任醫(yī)師,教授,碩士生導(dǎo)師,研究方向:急性肺損傷的防治,通訊作者,Tel:031l-86095367,E-mail:syicu@rip.sina.com胞株MH—S細(xì)胞TNF—,IL一1B的生成及表達(dá),表現(xiàn)出一定的抗炎作用J.但其作用機制尚不明確.研究顯示,NF—KB在LPS誘導(dǎo)的TNF—及IL一1B基因表達(dá)中起關(guān)鍵作用J.因此,本實驗主要在細(xì)胞水平探討DATS的抗炎效應(yīng)是否與調(diào)控NF—KB活性有關(guān).1材料與方法1.1小鼠肺泡巨噬細(xì)胞株MH-S細(xì)胞的培養(yǎng)及處理MH—S細(xì)胞(購自美國

6、ATCC公司)在含10%胎牛血清,100U?ml青霉素及100mg?L鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng).用LPS1mg?L(0111:B4,美國Sigma公司)和(或)不同濃度的DATS(江蘇正大天晴藥業(yè),國藥準(zhǔn)字:H32025639)孵育細(xì)胞一定時間.1.2RT-PCR測定細(xì)胞因子mRNA表達(dá)用TR—Izol試劑(北京賽百盛生物公司)提取細(xì)胞總RNA.取總RNA4g,在逆轉(zhuǎn)錄酶(Promega公司)作用下,用隨機引物合成cDNA.在含有2mmol?LMgCl:,1UTaqDNA聚合酶(上海生工生物公司)及25pmol細(xì)胞因子特異性引物的25l反應(yīng)體系中,進行cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

7、.以B—actin為內(nèi)參對照.PCR循環(huán)參數(shù)為:預(yù)變性94~C3min;變性94℃45S;復(fù)性51.8℃45s(TNF.),52oC45s(IL一1B),55℃45s(B.actin);延伸72℃45S;35次循環(huán)后進一步延伸72~C5min.TNF—上游引物5一AGCCGATGGGrlq"GTA一3,下游引物5一AcrI3"一GGGCAGATTGA一3,擴增產(chǎn)物266bp;IL一1B上游引物5一GCrITI℃AGGCAGGCAGr