葡萄糖(glu) 己糖激酶終點(diǎn)法

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1、項(xiàng)目葡萄糖（GLU）方法己糖激酶終點(diǎn)法目錄1.檢測(cè)原理2.標(biāo)本采集與處理2.1受檢者的準(zhǔn)備2.2靜脈采血2.3抗凝劑2.4標(biāo)本處理3.試劑3.1試劑3.2校準(zhǔn)血清3.3試劑與校準(zhǔn)血清的穩(wěn)定性4.儀器5.操作6.計(jì)算7.操作性能7.1精密度7.2準(zhǔn)確度7.3靈敏度7.4可報(bào)告范圍7.5特異性7.6干擾8.參考值9.臨床意義附錄A:參數(shù)1.檢測(cè)原理在己糖激酶的作用下，葡萄糖與ATP反應(yīng)生成ADP和葡萄糖-6-磷酸。在葡萄糖-6-磷酸脫氫酶催化下，葡萄糖-6-磷酸與NAD+反應(yīng)生成NADH和6-磷酸葡萄糖。NADH在340nm處有最大吸收

2、，通過測(cè)定NADH的生成量與同樣處理的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)比較，可計(jì)算出血清中葡萄糖的含量。HK葡萄糖+ATP---------ADP+D-葡萄糖-6-磷酸G6PDH葡萄糖-6-磷酸+NAD+---------------6-磷酸葡萄糖酸+NADH2．標(biāo)本采集與處理2.1受檢者的準(zhǔn)備：病人空腹12h，不飲酒24h后采集血樣。體檢對(duì)象抽血前應(yīng)有兩周的的正常狀況記錄。注意有無(wú)應(yīng)用影響測(cè)試項(xiàng)目的藥物。此外，對(duì)于體檢者，采血的季節(jié)都應(yīng)做相關(guān)記錄，因?yàn)闃颖局懈黜?xiàng)目的含量有季節(jié)性變動(dòng)，為了前后比較應(yīng)在每年同一季節(jié)檢驗(yàn)。應(yīng)囑體檢對(duì)象在抽血前24小時(shí)內(nèi)不做劇

3、烈運(yùn)動(dòng)。有些藥物長(zhǎng)期應(yīng)用，可使患者糖代謝發(fā)生障礙，引起血糖增高，因而應(yīng)當(dāng)在使用這些藥物期間定期監(jiān)測(cè)血糖，避免引起高血糖。常用藥物中可致血糖增高的有以下幾類?！　√瞧べ|(zhì)激素：糖皮質(zhì)激素藥物如強(qiáng)的松、氫化可的松、抗炎松等，臨床應(yīng)用廣泛。糖皮質(zhì)激素可通過三條途徑影響糖代謝：（1）增強(qiáng)糖元分解；（2）使糖異生途徑活動(dòng)；（3）減少外周組織對(duì)葡萄糖的作用，因而血糖升高。如果大劑量或長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素治療，應(yīng)密切監(jiān)測(cè)血糖，根據(jù)情況適當(dāng)減少劑量或配合降糖藥物應(yīng)用?！　〖谞钕僦苿杭谞钕偌に兀椎獍?、甲狀腺素、甲狀腺球蛋白），可以促進(jìn)葡萄糖的吸收，加

4、速糖元分解及糖異生，使血糖增高。因而應(yīng)用甲狀腺制劑時(shí)應(yīng)嚴(yán)密觀察，特別是糖尿病病人需用甲狀腺制劑時(shí)應(yīng)慎重給藥?！　∧I上腺素：腎上腺素可動(dòng)員肝及肌肉的糖元分解，使血糖升高。一般來說，腎上腺素及擬腎上腺素制劑很少會(huì)長(zhǎng)時(shí)間就用，所以對(duì)血糖的影響不大?！　±騽亨邕纛惱騽╅L(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用，可使病人的糖耐量降低而升高血糖，可能是抑制胰島素分泌或使糖元分解的緣故。噻唪類利尿劑致高血糖大多出現(xiàn)在用藥2-3個(gè)月后，停藥能自行恢復(fù)?！　”茉兴帲喊ù萍に嘏c黃體酮樣衍生物，這些藥物均具有降低糖耐量和升高血糖的作用。因此患有糖尿病的育齡婦女，不能服用這些避孕

5、藥。　　異煙肼：異煙肼是抗結(jié)核病的一線藥物，治療結(jié)核病時(shí)用藥期至少在半年以上。長(zhǎng)期用異煙肼可影響糖代謝，使糖耐量降低，因此在用藥期間應(yīng)定期檢查血糖并采取相應(yīng)措施。當(dāng)糖尿病合并肺結(jié)核時(shí)，異煙肼忌與磺脲類降糖藥合用，否則可能產(chǎn)生不可逆糖尿病?！　∑渌喝鐭熕峒捌溲苌铩⒎脏玎侯愃幬?、生長(zhǎng)素、促腎上腺皮質(zhì)激素、雙香豆素、去甲基麻黃堿等藥物，均有增高血糖濃度的作用，使用時(shí)應(yīng)注意監(jiān)測(cè)血糖，避免引起高血糖或糖尿。2.2靜脈采血：除非是臥床的病人，一般在采血時(shí)取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外的分布，會(huì)影響測(cè)試項(xiàng)目的濃度。在采血前至少應(yīng)靜坐5分鐘，一

6、般從肘靜脈取血，使用止血帶的時(shí)間不超過1分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。2.3抗凝劑：血漿使用EDTANa2（1mg/mL）作為抗凝劑。2.4標(biāo)本處理：血標(biāo)本室溫放置30min～45min后離心分離血清或血漿，在兩小時(shí)內(nèi)檢測(cè)完畢；如兩小時(shí)內(nèi)不能檢測(cè)完畢，將離心分離血清或血漿置潔凈試管加蓋2-8℃保存。3．試劑3.1試劑：本科使用湖南永和陽(yáng)光科技有限責(zé)任公司GLU試劑盒，為液體單一試劑，各組分如下：組成R1:R2=5:1混合后濃度緩沖液100mmol/LPH=7.6己糖激酶（HK）>100U/ml葡萄糖-6-磷酸脫氫酶>300U/ml

7、ATP4.0mmol/LNAD+3.0mmol/L疊氮鈉0.09%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液5.55mmol/L(100mg/dl)3.2：校準(zhǔn)血清使用湖南永和陽(yáng)光科技有限責(zé)任公司提供的40項(xiàng)校準(zhǔn)血清。校準(zhǔn)頻次：空白定標(biāo)：每日需做試劑空白定標(biāo)。全點(diǎn)定標(biāo)：試劑換批號(hào)使用時(shí)或質(zhì)控結(jié)果超過規(guī)定的2SD范圍，需要全點(diǎn)定標(biāo)。3.3試劑與校準(zhǔn)血清的穩(wěn)定性：原包裝試劑儲(chǔ)存在2-8℃至標(biāo)簽所示失效日期。試劑開瓶后，在儀器中至少可保存30天。試劑儲(chǔ)存在18-22℃穩(wěn)定28天，試劑應(yīng)避免污染。試劑顏色為無(wú)色至淺粉色，當(dāng)試劑變色或者在546NM的吸光度高于0.15AB

8、S，按照試劑失效處理。多項(xiàng)校準(zhǔn)血清在2-8℃儲(chǔ)存至標(biāo)簽所示失效日期，復(fù)溶后-20℃保存，可穩(wěn)定一個(gè)月，只可凍融一次，避免反復(fù)凍融。參見校準(zhǔn)血清說明書。試劑盒配備的水標(biāo)準(zhǔn)液在2-8℃儲(chǔ)存至標(biāo)簽所示失效日期，開瓶后2-8℃儲(chǔ)存避免污染，可