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《尿素柱層析法分離共軛亞油酸異構(gòu)體的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、尿素柱層析法分離共軛亞油酸異構(gòu)體的研究研究了負(fù)載型尿素層析柱分離共軛亞油酸甲酯異構(gòu)體過程中的影響因素，考察了甲醇?xì)埩袅浚蛩嘏c硅膠的比例，不同溫度下結(jié)晶的固定相，不同過柱溫度，不同流動(dòng)相及負(fù)載溶劑對(duì)分離效果的影響，得到最佳條件下分離效果為10反12順共軛亞油酸含量從原料的40%提高到59%。關(guān)鍵詞尿素柱層析共軛亞油酸甲酯異構(gòu)體前言尿素柱層析法是利用被分離鏈狀分子在尿素負(fù)載固定相和流動(dòng)相之間的分配平衡常數(shù)的差異，經(jīng)過多次分配平衡實(shí)現(xiàn)分離目的的，侯相林等[1]利用尿素柱層析分離制得含量為83%以上的α-亞麻酸乙酯，證明尿素柱層析法對(duì)不同雙鍵數(shù)的鏈
2、狀分子具有較好的分離效果，而發(fā)明專利（￥￥￥）報(bào)道尿素柱層析法可以很好的分離順式油酸和反式油酸，說明在尿素柱層析分離過程中，反式油酸較順式油酸更容易保留在固定相中，反式油酸和尿素的結(jié)合穩(wěn)定性更接近飽和脂肪酸。而文獻(xiàn)####研究了神經(jīng)酸和芥酸在尿素柱層析中的分離行為，證明脂肪酸飽和尾鏈的長短是決定與尿素結(jié)合穩(wěn)定重要因素，而KlareSMarkley等發(fā)現(xiàn)不飽和脂肪酸與尿素的結(jié)合穩(wěn)定性常數(shù)和脂肪酸分子截面影響較大，脂肪酸分子橫截面越大包藏越困難，而不飽和雙鍵越多分子截面越大。共軛亞油酸是亞油酸共軛化的產(chǎn)物，亞油酸兩個(gè)順式雙鍵中的一個(gè)在共軛化過程中
3、會(huì)發(fā)生位移，同時(shí)順式雙鍵轉(zhuǎn)化為反式雙鍵。共軛亞油酸主要是（順9，反l1）二烯酸和（l0反，12順）二烯酸的混合物。這兩種異構(gòu)體所具有的生理功能有很大差異，為了更好的發(fā)揮其各自的優(yōu)異功能，有必要將兩種異構(gòu)體進(jìn)行分離。目前大都是將亞油酸從其他脂肪酸中純化的方法，沒有針對(duì)共軛亞油酸異構(gòu)體分離的直接方法，已經(jīng)做的比較好的方法有尿素包合法，該法雖然成本較低，但存在收率低，污染嚴(yán)重等問題；無溶劑尿素包合+超臨界CO2萃取技術(shù)+冷凍分離方法分離兩種異構(gòu)體，工藝復(fù)雜，成本高，產(chǎn)業(yè)化困難也有利用假絲酵母脂肪酶兩步選擇性酯化和分子蒸餾相結(jié)合，該方法雖然分離效果很
4、好，但是成本高，收率低，難于產(chǎn)業(yè)化。尿素柱層析的優(yōu)點(diǎn)：常壓低溫下實(shí)現(xiàn)各種脂肪酸的分離，能夠比較完整的保留各脂肪酸的功效與生理功能。工藝簡(jiǎn)單、產(chǎn)品純度高、操作成本低、甲醇和尿素用量少、易于回收、綠色環(huán)保、易于產(chǎn)業(yè)化。1實(shí)驗(yàn)材料與方法1.1主要材料與試劑無水甲醇、石油醚、尿素、無水硫酸鎂、濃硫酸均為分析純；柱層析硅膠、共軛亞油酸樣品（油酸13.1%、c9，tl1～CLA32%、c12，tl0～CLA40.3%、其他CLA14.6%）。1.2設(shè)備與儀器層析柱（2×60）cm；自動(dòng)控溫水浴裝置；磁力攪拌器；真空干燥箱；減壓蒸餾裝置；電子天平：上海恒平
5、；HXSPGC-950氣相色譜儀。1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1共軛亞油酸的甲酯化處理在100ml無水甲醇中加入3ml濃硫酸，將20g共軛亞油酸樣品加入其中，50℃水浴回流5h，減壓蒸餾脫除甲醇后，用石油醚和水（1：1，V/V）萃取分液，有機(jī)相用蒸餾水洗至中性，無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸餾脫除石油醚，得到共軛亞油酸甲酯。1.3.2柱層析固定相的制備稱取一定量尿素和甲醇并在60℃下完全溶解，加入一定量的柱層析用硅膠，在此溫度下攪拌10min，冷卻至室溫后，將下層硅膠翻動(dòng)與上層尿素晶體混合，放入冰箱上層。取出后抽濾去除甲醇，并置于真空烘箱中烘干。1.
6、3.3固定相中溶劑殘留量的檢測(cè)精確移取2mL蒸餾水于八個(gè)試管中（容量瓶），分別加入3μL、5μL、10μL、25μL、50μL、75μL、100μL、125μL無水甲醇，在柱溫100℃，汽化室和檢測(cè)室150℃的色譜條件下（檢測(cè)器），進(jìn)樣量3μL、，得到甲醇體積與峰面積的線性關(guān)系曲線：y=0.9532x，線性度R2=0.9972。準(zhǔn)確稱取0.5g固定相，加入2Ml蒸餾水，充分搖動(dòng)，過濾，濾液景象氣相色譜分析，進(jìn)樣量3μL。以經(jīng)過換算得到的線性曲線w%=0.1906A作為溶劑殘留量大小的比較依據(jù)。其中：w為固定相中甲醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，A為色譜圖中甲醇
7、峰面積。1.3.4裝柱稱取60g柱層析固定相放入石油醚中浸泡、攪動(dòng)除去其中的氣泡；帶氣泡驅(qū)除完全，濕法裝入層析玻璃管柱中，制備成負(fù)載型尿素層析柱。1.3.5尿素柱層析分離共軛亞油酸甲酯取一定量的共軛亞油酸甲酯，加入到層析柱上層，以石油醚為洗脫劑洗脫，每10mL收集一個(gè)洗脫份，對(duì)洗脫份進(jìn)行色譜分析，確定共軛亞油酸各異構(gòu)體含量。1.3.6共軛亞油酸異構(gòu)體的檢測(cè)初溫200℃，汽化室和檢測(cè)室溫度為230℃，TL9900色譜工作站，氫火焰檢測(cè)器，峰面積歸一化法計(jì)算共軛亞油酸甲酯的相對(duì)含量。檢測(cè)方法？？？？？？2結(jié)果與討論2.1共軛亞油酸甲酯原料的組成甲
8、酯化后的共軛亞油酸樣品進(jìn)行氣相色譜分析，得到共軛亞油酸樣品組成如圖1，A1為油酸15.46%，A2為c9，t11共軛亞油酸31.37%，A3為t10，c12共軛亞油
