sop標(biāo)準(zhǔn)操作程序-ck

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1、SOP標(biāo)準(zhǔn)操作程序CK肌酸激酶（貨號(hào)：OSR6179,OSR6279）實(shí)驗(yàn)原理：測(cè)定CK（EC2.7.3.2）用于心肌梗塞的診斷和治療以及肌性疾病，例如：杜興肌營(yíng)養(yǎng)不良癥。CK主要來源于骨骼肌、心肌與腦組織。在各種肌肉疾病與心肌梗塞時(shí)升高。在心肌梗塞時(shí)CK的高峰主要出現(xiàn)于胸痛后的24到36小時(shí)，升高可以達(dá)到正常值上限的10倍。在Reye’s綜合征CK可以升高70倍。方法學(xué)：Olympus公司CK的測(cè)定方法采用的是改良Szasz法，CK能使磷酸肌酸和ADP中的磷酸鍵轉(zhuǎn)移生成肌酸和ATP。ATP與葡萄糖在HK已糖激酶與鎂離子的作用下生成6-磷酸-葡

2、萄糖。6-磷酸-葡萄糖與NADP在6-磷酸-葡萄糖脫氫酶作用下生在6-磷酸-葡萄糖酸和NADPH。在340/380nm下測(cè)定NADPH形成的速率來測(cè)定CK的活性。CK磷酸肌酸+ADP-------------﹥肌酸+ATPHKATP+葡萄糖-------------﹥ADP+6-磷酸葡萄糖G-6-PDH6-磷酸葡萄糖+NADP-------------﹥6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H標(biāo)本：病人準(zhǔn)備：無特殊要求。類型：無溶血的血清或肝素化的血漿。標(biāo)本凝集后盡快分離血清，輕微的溶血會(huì)被紅細(xì)胞中的ADK污染。不可以使用EDTA、枸櫞酸鹽、草酸鹽血漿

3、。標(biāo)本準(zhǔn)備：避光保存可以保持最的穩(wěn)定性。CK可以在20～25℃穩(wěn)定4小時(shí)，2～8℃穩(wěn)定8～12小時(shí)，﹣20℃可以穩(wěn)定一個(gè)月。儀器與材料:儀器：奧林巴斯AU640生化分析儀材料：奧林巴斯AU640肌酸激酶同功酶（CK）參與反應(yīng)成份的最終濃度：咪唑緩沖液（PH6.05）72mmol/LHK≧2.5kU/LNADP1.97mmol/L醋酸鎂20.9mmol/LG-6-PDH≧1.5kU/LADP2.0mmol/LAMP5mmol/LDiadenosinepentaphosphate0.01mmol/LEDTA4.0mmol/L葡萄糖16mmol/L磷

4、酸肌酸68mmol/LN-乙酰半胱氨酸24mmol/L其中含有穩(wěn)定劑與保護(hù)劑。注意：1.此試劑為體外診斷用。2.不要入口，吞下有害。3.保護(hù)劑為疊氮鈉，與下水管中的銅反應(yīng)形成爆炸性化合物，如果排向下水道請(qǐng)用大量的水沖洗。試驗(yàn)用試管的直徑在12～16mm。試劑準(zhǔn)備：奧林巴斯AU640的CK試劑是即開即用的。無需特殊準(zhǔn)備。執(zhí)行參數(shù)（性能參數(shù)）：以下數(shù)據(jù)是根據(jù)奧林巴斯AU640CK試劑已經(jīng)建立的程序。重復(fù)性：重復(fù)性的評(píng)估是根據(jù)NCCLS推薦的典型方法，AU640批內(nèi)重復(fù)性小于5%，總不精密度小于10%。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS

5、的規(guī)則。N=100批內(nèi)精密度總精密度平均值（U/L）SDCV%SDCV%1130.60.51.11.01440.60.42.01.45251.60.34.40.8方法學(xué)比較：奧林巴斯AU640CK（方法1）與其它奧林巴斯分析儀器（方法2），共同做181個(gè)病人標(biāo)本。相關(guān)系數(shù)達(dá)到1.000，回歸方程如下：CK方法1=（CK方法2×1.033）+0.7病人結(jié)果數(shù)值分布：15～1034U/L敏感度：每變化0.12毫吸光度相當(dāng)于1U/L。試劑的貯存：1.當(dāng)保存于2～8℃，不開蓋情況下至標(biāo)簽的失效期。2.開蓋后放于儀器中可以穩(wěn)定30天。變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有濁

6、度時(shí)，不能繼續(xù)使用。校準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)液的準(zhǔn)備：這個(gè)實(shí)驗(yàn)不需要標(biāo)準(zhǔn)液。校準(zhǔn)程序：CK的校準(zhǔn)中基于NADPH的摩爾消光系數(shù)，在340/380nm為4960。質(zhì)控：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把奧林巴斯水平I與II質(zhì)控（DR0061&62）做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析。操作程序（逐步地）：AU640開機(jī)1.認(rèn)兩瓶清洗劑有足夠的量。2.打開蒸餾水供應(yīng)系統(tǒng)的閥門。3.如果沒有設(shè)定自動(dòng)開機(jī)，請(qǐng)按分析儀器上的[POWERON]鍵。4.確認(rèn)打印機(jī)為開機(jī)并處于聯(lián)機(jī)狀態(tài)。5.在[StartCondition]屏幕，輸入所需信息，并按F2退出。6.如果有需要請(qǐng)進(jìn)入password。7.確認(rèn)

7、儀器上的在線試劑的位置是否正確、數(shù)量（體積）是否充足，不足請(qǐng)?zhí)砑硬⒃谙到y(tǒng)狀態(tài)中的試劑狀態(tài)檢查試劑。8.在急診臺(tái)Wash1的位置的試管中加滿一支清洗液。開始分析:1.把定標(biāo)、質(zhì)控、和標(biāo)本架放在儀器的RackFeed上。2.用鼠標(biāo)點(diǎn)擊在屏幕最上方[開始分析]圖標(biāo)。3.點(diǎn)擊F2退出鍵退到主屏幕。分析參數(shù)樣品體積4微升吐水量0微升試劑I體積80微升吐水量0微升試劑II體積80微升吐水量0微升波長(zhǎng)340/380方法Rate讀點(diǎn)17/27溫度37℃完整的實(shí)驗(yàn)參數(shù)與操作程序可以在AU640用戶手冊(cè)中查到。計(jì)算：無需手工計(jì)算，結(jié)果為在37℃自動(dòng)以U/L打印。報(bào)

8、告結(jié)果:參考范圍：32～237U/L參考值會(huì)因年齡、性別、飲食及地域的不同而不同。根根據(jù)一個(gè)好的實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)驗(yàn)最好建立自已實(shí)驗(yàn)室的參考值。不正常結(jié)果的處