sop標(biāo)準(zhǔn)操作程序-ckmb

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1、SOP標(biāo)準(zhǔn)操作程序CKMB肌酸激酶同功酶（貨號：OSR6153）實(shí)驗(yàn)原理：測定CKMB（EC2.7.3.2）用于心肌梗塞的診斷和治療以及肌性疾病，例如：杜興肌營養(yǎng)不良癥。CK是由兩分子聚合物，由M和B兩個亞基組成，同功酶分為CKMM、CKMB和CKBB三種。在心肌梗塞時CKMM的高峰主要出現(xiàn)于胸痛后的18到30小時，升高很像總CK活性。可是CKMB的高峰出現(xiàn)于胸痛后的12小時，比總CK活性和CKMM要早。在心肌梗塞中測定CK與CKMB活性的重要性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于總CK。方法學(xué)：Olympus公司CKMB的測定

2、方法采用的是改良Szasz法，試劑1中含有M亞基的抗體，這樣就抑制了M亞基的活性。B亞基的活性在加入R2后表現(xiàn)出來。CK能使磷酸肌酸和ADP中的磷酸鍵轉(zhuǎn)移生成肌酸和ATP。ATP與葡萄糖在HK已糖激酶與鎂離子的作用下生成6-磷酸-葡萄糖。6-磷酸-葡萄糖與NADP在6-磷酸-葡萄糖脫氫酶作用下生在6-磷酸-葡萄糖酸和NADPH。在340/380nm下測定NADPH形成的速率來測定CKMB的活性。CK磷酸肌酸+ADP-------------﹥肌酸+ATPHKATP+葡萄糖-------------﹥A

3、DP+6-磷酸葡萄糖G-6-PDH6-磷酸葡萄糖+NADP-------------﹥6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H標(biāo)本：病人準(zhǔn)備：無特殊要求。類型：無溶血的血清或肝素化的血漿。標(biāo)本凝集后盡快分離血清，輕微的溶血會被紅細(xì)胞中的ADK污染。不可以使用EDTA、枸櫞酸鹽、草酸鹽血漿。標(biāo)本準(zhǔn)備：避光保存可以保持最的穩(wěn)定性。CK可以在20～25℃穩(wěn)定4小時，2～8℃穩(wěn)定8～12小時，﹣20℃可以穩(wěn)定一個月。儀器與材料:儀器：奧林巴斯AU640生化分析儀材料：奧林巴斯AU640肌酸激酶同功酶（CKMB）參與反

4、應(yīng)成份的最終濃度：咪唑緩沖液（PH6.7）0.1mmol/LHK≧2.5kU/LNADP2.0mmol/L醋酸鎂10mmol/LG-6-PDH≧1.5kU/LADP2.0mmol/LAMP5mmol/LDiadenosinepentaphosphate0.01mmol/LEDTA2.0mmol/L葡萄糖20mmol/L磷酸肌酸30mmol/LN-乙酰半胱氨酸20mmol/LCK-M亞基的抗體變化的其中含有穩(wěn)定劑與保護(hù)劑。注意：1.此試劑為體外診斷用。2.不要入口，吞下有害。保護(hù)劑為疊氮鈉，與下水管中的

5、銅反應(yīng)形成爆炸性化合物，如果排向下水道請用大量的水沖洗。試驗(yàn)用試管的直徑在12～16mm。試劑準(zhǔn)備：試劑1：紅蓋的的全部酶試劑必須緩沖液溶解。試劑2：綠蓋的的全部酶試劑必須緩沖液溶解。執(zhí)行參數(shù)（性能參數(shù)）：以下數(shù)據(jù)是根據(jù)奧林巴斯AU640CKMB試劑已經(jīng)建立的程序。重復(fù)性：重復(fù)性的評估是根據(jù)NCCLS推薦的典型方法，AU640批內(nèi)重復(fù)性小于5%或SD≦2U/L，總不精密度小于10%或SD≦4U/L。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。N=60批內(nèi)精密度總精密度平均值（U/L）SDC

6、V%SDCV%21.70.371.750.622.85202.20.860.421.310.651290.24.760.376.760.52方法學(xué)比較：奧林巴斯AU640CKMB（方法1）與其它奧林巴斯分析儀器（方法2），共同做62個病人標(biāo)本。相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.99，回歸方程如下：CKMB方法1=（CKMB方法2×0.939）－0.64病人結(jié)果數(shù)值分布：10.0～1750U/L試劑的貯存：1.當(dāng)保存于2～8℃，不開蓋情況下至標(biāo)簽的失效期。2.開蓋后放于儀器中可以穩(wěn)定5天。變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有濁度時，不能繼

7、續(xù)使用。校準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)液的準(zhǔn)備：這個實(shí)驗(yàn)不需要標(biāo)準(zhǔn)液。校準(zhǔn)程序：CKMB的校準(zhǔn)中基于NADPH的摩爾消光系數(shù)，在340/380nm為4960。質(zhì)控：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把奧林巴斯水平I與II質(zhì)控（DR0061&62）做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，也可以用CKMB三種水平的質(zhì)控血清。操作程序（逐步地）：AU640開機(jī)1.認(rèn)兩瓶清洗劑有足夠的量。2.打開蒸餾水供應(yīng)系統(tǒng)的閥門。3.如果沒有設(shè)定自動開機(jī)，請按分析儀器上的[POWERON]鍵。4.確認(rèn)打印機(jī)為開機(jī)并處于聯(lián)機(jī)狀態(tài)。5.在[StartCondition]屏幕，輸

8、入所需信息，并按F2退出。6.如果有需要請進(jìn)入password。7.確認(rèn)儀器上的在線試劑的位置是否正確、數(shù)量（體積）是否充足，不足請?zhí)砑硬⒃谙到y(tǒng)狀態(tài)中的試劑狀態(tài)檢查試劑。8.在急診臺Wash1的位置的試管中加滿一支1NHCL的樣品針清洗液。開始分析:1.把定標(biāo)、質(zhì)控、和標(biāo)本架放在儀器的RackFeed上。2.用鼠標(biāo)點(diǎn)擊在屏幕最上方[開始分析]圖標(biāo)。3.點(diǎn)擊F2退出鍵退到主屏幕。分析參數(shù)樣品體積5微升吐水量0微升試劑I體積125微升吐水量0微升試劑II體積