酶聯(lián)免疫吸附分析法測定水產(chǎn)品及水中孔雀石綠和無色孔雀石綠

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1、酶聯(lián)免疫吸附分析法測定水產(chǎn)品及水中孔雀石綠和無色孔雀石綠第22卷第1期2010年1月化學研究與應用ChemicalResearchandApplicationVoI.22.No.1Jan.,2010文章編號:1004—1656(2010)01-0042-05酶聯(lián)免疫吸附分析法測定水產(chǎn)品及水中孔雀石綠和無色孑L雀石綠邢瑋瑋,王榕妹,王俊卿,楊紅,賀莉,鄧安平h(1.四川大學化學學院,四川成都610064;2.四川大學華西藥學院,四川成都610041)摘要:本文報道一種同時測定水產(chǎn)品及水樣中孔雀石綠(MG)和無色孔雀石綠(LMG)的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析法.

2、對無色孔雀石綠分子進行修飾,使其與載體蛋白交聯(lián),得到免疫原和包被抗原,經(jīng)過多次免疫動物制得抗無色孔雀石綠的多克隆抗體.在優(yōu)化的實驗條件下,Ic值(標準曲線中吸光度抑制至最大吸光度值的50%時所對應的待測物濃度)為0.9～2.6g/L,檢出限為0.02—0.10Ixs/L,無色孔雀石綠在水樣及水產(chǎn)品中的回收率為76.2～95.O%,與孑L雀石綠的交叉反應率為95.25%.真實樣品測定中,兩種食用魚養(yǎng)殖水樣及一個魚樣中未檢出孔雀石綠和無色孑L雀石綠,但在觀賞魚養(yǎng)殖水樣及另一魚樣中檢出孔雀石綠和無色孔雀石,濃度分別為1.84g/L和1.38L.關鍵詞:孔雀石綠;

3、無色孔雀石綠;酶聯(lián)免疫吸附分析法;食品分析中圖分類號:0621.3文獻標識碼:ASensitiveenzyme-linkedimmunosorbentassayfordeterminationofmalachitegreenandleucomalachitegreeninfishandfishpondwatersamplesXingWei—wei',WANGRong.mei,WANGJun.qing,YANGHong,HELi,DENGAn—ping(1.CollegeofChemistry,SichuanUniversity,Chengdu610064,

4、China;2.WestChinaSchoolofPharmacy,SichuanUniversity,Chengdu610041,China)Abstract:AnindirectcompetitiveELISAforthedeterminationofmalachitegreenandIeucomalachitegreeninfishandfishpondwatersamplesWaSdeveloped.Leucomalachitegreenmoleculewasmodifiedandcoupledtocarrierproteinstomakethec

5、oatingantigenandimmunogen.TheantibodiesagainstLMGwasobtainedfromrabbits.Basedontheoptimizedconditions,IC5ovalue(concentrationofanalyteproducing50%ofabsorbancedecreaseinstandardcurve)anddetectionlimitWasfoundintherangeof0.9～2.6IXg/Land0.02～0.IOIXg/L.respectively.RecoveriesofLMGinwa

6、terandfishsampleswere76.2%一95.0%.Thecross—reactivityofantibodywithMGWasfoundtobe95.25%.NodetectableMGandLMGandwasobservedinonefishsampleandtwofishfarmingwatersamples;whiletheMGandLMGconcentrationsinonepetfishpondwatersampleandanotherfishsamleweref0undat1.84IXg/Land1.38s/L,respecti

7、vely.Keywords:Malachitegreen;Leucomalachitegreen;Enzyme—linkedimmunosorbeutassay;foodanMysis收稿日期:2009-04-28:修回日期:20094)5-23基金項目:國家自然科學斌金資助項目(20675054)聯(lián)系人簡介:鄧安平(1962.),男.教授,博士生導師,研究方向免疫分析.Email:denganping6119@yahoo.com.cn化學研究與應用第22卷1.3免疫原及包被抗原的制備利用重氮化法¨將無色孔雀石綠修飾物與牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(O

8、VA)交聯(lián),制成免疫原及包被抗原.具體步驟如下:40rag氨基無色