e蛋白檢測技術(shù)在宮頸癌早期篩查中的應用

《e蛋白檢測技術(shù)在宮頸癌早期篩查中的應用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、E7蛋白檢測技術(shù)在宮頸癌早期篩查中的應用前言宮頸癌是中國女性第二大最常見的惡性腫瘤，也是發(fā)展中國家女性癌癥死亡的主要原因。我國每年新增宮頸癌病人13萬多，每年約有5萬人死于宮頸癌，且發(fā)病年齡明顯趨于年輕化，35歲以下的宮頸癌病例出現(xiàn)上升趨勢，嚴重危害婦女健康，因此宮頸癌的篩查和預防具有重要意義。宮頸癌的發(fā)展一般需要10年左右時間，在這期間，若能及早發(fā)現(xiàn)癌前病變，就可以有效預防癌癥的發(fā)生。《2015年美國癌癥篩查指南》推薦：1）21-29歲女性，應單獨進行宮頸細胞學檢查，每3年1次；2）30-65歲女性，優(yōu)先推薦細胞學和HPV聯(lián)合

2、篩查，每5年1次,也可每3年1次細胞學篩查；3）對于前10年內(nèi)細胞學檢測連續(xù)3次陰性或細胞學和HPV聯(lián)合篩查連續(xù)2次陰性且最后一次篩查在5年內(nèi)的女性，65歲后應停止任何方式的篩查；4）任何年齡段都不需要通過任何方式每年篩查。目前臨床常用的宮頸癌篩查方法包括：傳統(tǒng)的巴氏細胞學檢測、液基薄層細胞涂片、HPVDNA分子檢測等。近年來，宮頸癌篩查出現(xiàn)了一系列新技術(shù)包括：HPVmRNA檢測、“替代性生物標志物”（surrogatemarker）檢測等。E7癌蛋白的表達和功能是宮頸癌發(fā)生和發(fā)展的重要條件大量研究發(fā)現(xiàn)，人乳頭瘤病毒（Human

3、papillomaviruses，HPV）與宮頸癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，是所有宮頸鱗狀細胞癌（SCC）和大部分宮頸腺癌的致癌病原體。目前已經(jīng)有200多種的HPV亞型被鑒定[1]，根據(jù)其致癌性分為高危型HPV（hrHPV）和低危型HPV（lrHPV），其中14種主要高危型HPV與宮頸癌的發(fā)生和演變有關(guān)。雖然HPV感染的人群比例很大，但HPV感染不等于宮頸癌，一過性的陽性攜帶者中80%以上在6到12個月內(nèi)會自然清除，只有很少一部分會進展到宮頸病變或癌癥。持續(xù)性的hrHPV感染，使病毒基因得以整合到人體細胞基因組內(nèi)，啟動病毒致癌基因E6，

4、E7蛋白表達。E6，E7蛋白被證明是驅(qū)動宮頸癌發(fā)展的主要致癌因子[2,3]。高表達的E7蛋白與Rb結(jié)合使Rb-E2F復合物解離，E2F從pRb蛋白中釋放，Rb通路失控，反饋刺激p16INK4A、Ki67、細胞周期蛋白A（CyclinA）和細胞周期蛋白E（CyclinE）等在內(nèi)的眾多細胞增殖相關(guān)基因的表達，使宮頸上皮細胞的細胞周期發(fā)生紊亂。因此，“E7蛋白表達是維持宮頸癌及其高級別癌前病變發(fā)展必需的?！薄狤7蛋白表達與宮頸癌發(fā)展存在因果關(guān)系。細胞學診斷技術(shù)進展自Papanicolaou發(fā)明巴氏涂片法以來，巴氏涂片細胞學檢查作為宮

5、頸癌的篩查方法已有70多年的歷史，作為第一代細胞學檢測技術(shù)巴氏圖片的假陰性率在50%以上；而本世紀初以液基細胞學（liquidbasedcytology）為代表的第二代細胞學檢測技術(shù)改善了樣本的制片質(zhì)量，但檢測靈敏度在50~70%之間仍不能滿足臨床需求；以免疫細胞學（immuno-cytology）為代表的第三代細胞學檢測技術(shù)，代表性產(chǎn)品為羅氏的CINtecPLUS（p16INK4A/Ki67雙染），據(jù)PALMS研究報道，p16INK4A/Ki67的靈敏度能夠達到85%以上[4]。這些替代性的蛋白標志物在正常宮頸細胞中也有內(nèi)源性

6、表達，由此影響了它們在宮頸癌診斷方面的應用。而僅在高危型HPV轉(zhuǎn)化的宮頸癌細胞中表達的E7癌蛋白無疑是宮頸癌早期診斷的理想標志物[5]。1514345468829037576.jpg圖1細胞學診斷技術(shù)發(fā)展三階段E7蛋白標志物在細胞學上的應用E7-ICC是針對宮頸上皮脫落細胞中來自于HPV基因編碼的E7癌蛋白表達的臨床檢測新方法，通過使用E7單克隆抗體，能夠特異性識別表達E7蛋白的癌變細胞（試驗操作過程如圖2所示）。檢測結(jié)果在細胞樣本中出現(xiàn)明顯的棕色胞質(zhì)染色，即可認為該細胞為E7-ICC陽性染色。（臨床實驗室2016年第9期）。1

7、514345499594036889.jpg圖2E7-ICC技術(shù)試驗程序采用的液基細胞學制片技術(shù)評估E7-ICC技術(shù)的臨床應用。圖3中陽性對照采用高級別鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）的臨床樣本，陰性對照為未見上皮內(nèi)病變（NILM）的正常宮頸上皮細胞臨床樣本。結(jié)果如圖所示：在表達E7蛋白的轉(zhuǎn)化細胞中呈現(xiàn)棕色染色，且定位于形態(tài)學為HSIL的細胞中（圖3A，C）；而在NILM的樣本中未檢測到E7單抗的染色。值得注意的是，E7癌蛋白是否表達可以用來評估LBC報告（如HSIL，LSIL和ASC-US等）中不同級別宮頸損傷程度的惡變傾向，證明了

8、使用特定的生物標志物解釋細胞學結(jié)果的可行性。這對于細胞形態(tài)學某些不確定病例的分流是非常有必要的，例如ASC-US。如圖3E所示：該病例傳統(tǒng)細胞學報告為ASC-US，在癌前病變細胞中檢測除了E7癌蛋白的表達。另外，E7-ICC檢測技術(shù)與目前市場上絕大部分的國產(chǎn)（安