cxcr4基因轉(zhuǎn)染的豬bmscs體外誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的實驗研究

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1、CXCR4基因轉(zhuǎn)染的豬BMSCs體外誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的實驗研究作者：陳中璞，李擁軍，姚玉宇，蔣益波，錢琪，潘嘯東【摘要】目的:探討基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(SDF1)受體CXCR4基因轉(zhuǎn)染的豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)體外誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的可行性。方法：按照Nance方法培養(yǎng)BMSCs，轉(zhuǎn)染帶熒光的CXCR4基因，流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染后BMSCs的細(xì)胞周期，用5氮胞苷(5aza)誘導(dǎo)，并行結(jié)蛋白、肌球蛋白重鏈、心肌特異性肌鈣蛋白I免疫組化鑒定。對照組為未轉(zhuǎn)染CXCR4基因的BMSCs。結(jié)果：體

2、外培養(yǎng)的原代BMSCs10～14d達到融合，CXCR4基因轉(zhuǎn)染后的BMSCs能成功表達CXCR4，轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞周期無明顯改變。與對照組相同，經(jīng)5aza刺激后，部分BMSCs成梭形，結(jié)蛋白、肌球蛋白重鏈、心肌特異性肌鈣蛋白I免疫組化染色均為陽性。結(jié)論:CXCR4基因轉(zhuǎn)染的豬BMSCs在體外條件下生長穩(wěn)定,傳代后仍保持未分化狀態(tài),有分化成心肌樣細(xì)胞的潛能?！娟P(guān)鍵詞】基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1;CXCR4基因;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;體外誘導(dǎo);心肌樣細(xì)胞　　[Abstract]Objective:Toinvestigat

3、ethepossibilityofinducingporcinebonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)13whichweretransfectedbyCXCR4genefirst,theacceptorofSDF1,todifferentiateintocardiomyocyteslikecellsinvitro.Methods:BMSCswereisolatedfrombonemarrowandpurifiedbycentrifuge.Theproliferati

4、onandgrowthcharacteristicswereobservedinprimaryandpassageculture.BMSCsweretransfectedbyCXCR4gene,thenanalyzedcellcyclebyflowcytometer.Afterbeingcoculturedwith5azacytidinefor24h,theculturedcellswereevaluatedbyimmunohistochemicalstains.ThecontrolgroupwasB

5、MSCswithoutCXCR4gene.Results:Thecellswerefusedinsinglelayerafterplatingfor10～14days.BMSCswhichweretransfectedcouldexpressCXCR4successfully,andthecellcycledidntchanged.Thesameasthecontrolgroup,afterbeingcoculturedwith5azacytidine,someoftransfectedBMSCsb

6、ecamespindlelikeandformedanetworkofmyotubule.MyotubularcellswerefoundtobestainedwithpositivelyMHC,desminandTnI.Conclusion:PorcineBMSCswhichweretransfectedbyCXCR4genefirstcanbeisolatedfrompostnatalbonemarrowthroughtheiradherentability,andcanbeinducedtodif

7、ferentiateintocardiomyocyteslikecellsinvitro.　　[Keywords]stromalcellderivedfactor1;CXCR4gene;bonemarrowmesenchymalstemcells;induceinvitro;13cardiomyocyteslikecells　　心肌壞死是心血管系統(tǒng)的常見病，其顯著特征是功能性心肌細(xì)胞大量死亡。一般認(rèn)為，成熟的心肌細(xì)胞是終末分化細(xì)胞，缺乏再生能力[1-2]。有研究[3]表明，少數(shù)成體心肌細(xì)胞在終末分化

8、之后還具有分裂能力，但由于數(shù)量極少，不能達到修復(fù)損傷心肌的目的。因此，增加心肌細(xì)胞或心肌樣細(xì)胞的數(shù)量可以改善此類病人的心功能，細(xì)胞移植成為治療心肌壞死的新策略。然而單純細(xì)胞移植的效率卻不高[4-5],為提高移植效率，人們的目光轉(zhuǎn)移到在干細(xì)胞的動員、歸巢和分化過程中發(fā)揮重要作用的細(xì)胞因子上。其中，基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(SDF1)與其特異性受體CXCR4相互作用，參與到干細(xì)胞動員、歸巢、黏附、存活增殖的各個步驟，在心臟的細(xì)胞治療