cxcr4基因轉(zhuǎn)染的豬bmscs體外誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究

《cxcr4基因轉(zhuǎn)染的豬bmscs體外誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。

1、CXCR4基因轉(zhuǎn)染的豬BMSCs體外誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究：陳中璞，李擁軍，姚玉宇，蔣益波，錢琪，潘嘯東【摘要】目的:探討基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(SDF1)受體CXCR4基因轉(zhuǎn)染的豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)體外誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的可行性。方法：按照Nance方法培養(yǎng)BMSCs，轉(zhuǎn)染帶熒光的CXCR4基因，流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染后BMSCs的細(xì)胞周期，用5氮胞苷(5aza)誘導(dǎo)，并行結(jié)蛋白、肌球蛋白重鏈、心肌特異性肌鈣蛋白I免疫組化鑒定。對照組為未轉(zhuǎn)染CXCR4基因的BMSCs。結(jié)果：體外培養(yǎng)的原代BMSCs10～14d達(dá)到融

2、合，CXCR4基因轉(zhuǎn)染后的BMSCs能成功表達(dá)CXCR4，轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞周期無明顯改變。與對照組相同，經(jīng)5aza刺激后，部分BMSCs成梭形，結(jié)蛋白、肌球蛋白重鏈、心肌特異性肌鈣蛋白I免疫組化染色均為陽性。結(jié)論:CXCR4基因轉(zhuǎn)染的豬BMSCs在體外條件下生長穩(wěn)定,傳代后仍保持未分化狀態(tài),有分化成心肌樣細(xì)胞的潛能?！娟P(guān)鍵詞】基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1;CXCR4基因;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;體外誘導(dǎo);心肌樣細(xì)胞　　[Abstract]Objective:Toinvestigatethepossibilityofinducingporcinebonema

3、rroesenchymalstemcells(BMSCs)yocyteslikecellsinvitro.Methods:BMSCsbonemarroaryandpassageculture.BMSCseter.Afterbeingcoculturedmunohistochemicalstains.Thecontrolgroupeasthecontrolgroup,afterbeingcoculturedeoftransfectedBMSCsbecamespindlelikeandformedayotubule.Myotubular

4、cellsinandTnI.Conclusion:PorcineBMSCspostnatalbonemarroyocyteslikecellsinvitro.　　[Keyalcellderivedfactor1;CXCR4gene;bonemarroesenchymalstemcells;induceinvitro;cardiomyocyteslikecells　　心肌壞死是心血管系統(tǒng)的常見病，其顯著特征是功能性心肌細(xì)胞大量死亡。一般認(rèn)為，成熟的心肌細(xì)胞是終末分化細(xì)胞，缺乏再生能力[1-2]。有研究[3]表明，少數(shù)成體心肌細(xì)胞在終末分

5、化之后還具有分裂能力，但由于數(shù)量極少，不能達(dá)到修復(fù)損傷心肌的目的。因此，增加心肌細(xì)胞或心肌樣細(xì)胞的數(shù)量可以改善此類病人的心功能，細(xì)胞移植成為治療心肌壞死的新策略。然而單純細(xì)胞移植的效率卻不高[4-5],為提高移植效率，人們的目光轉(zhuǎn)移到在干細(xì)胞的動(dòng)員、歸巢和分化過程中發(fā)揮重要作用的細(xì)胞因子上。其中，基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(SDF1)與其特異性受體CXCR4相互作用，參與到干細(xì)胞動(dòng)員、歸巢、黏附、存活增殖的各個(gè)步驟，在心臟的細(xì)胞治療中有著巨大的應(yīng)用潛能[6-8]。而骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)是全能干細(xì)胞分化而來的非造血系干細(xì)胞，具有多向分化

6、潛能，可以分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞等[9-12]。因此，將SDF1/CXCR4和BMSCs聯(lián)合起來，將成為治療心肌壞死的一個(gè)新途徑。為此，本研究分離培養(yǎng)豬的BMSCs并轉(zhuǎn)染CXCR4基因，經(jīng)過流式細(xì)胞儀篩選和細(xì)胞周期測定后用5氮胞苷(5aza)體外誘導(dǎo)，探討其分化為心肌樣細(xì)胞的可行性。　　1材料與方法　　1.1豬BMSCs的體外分離培養(yǎng)和擴(kuò)增　　按照Nance方法[13]略加改進(jìn)，選擇健康小型豬(出生3～6個(gè)月，體質(zhì)量20～25kg，貴州香豬)，在凈化工作室對豬進(jìn)行無菌的骨髓穿刺術(shù)，抽取骨髓液10ml(肝素3000U

7、·ml-1抗凝)，于干細(xì)胞研究室行細(xì)胞分離。將密度為1.077g·ml-1的FicollPaque分離液加入無菌的離心管中，采集的骨髓液用DMEM以1∶5稀釋后加到FicollPaque分離液上，利用密度梯度離心法3000r·min-1離心20min，分離出單個(gè)核細(xì)胞。細(xì)胞計(jì)數(shù)后以1×106ml-1的濃度接種于加入含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)液(包括低糖DMEM，10%胎牛血清，0.25g·L-1兩性霉素B)的培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后BMSCs即可貼壁，呈紡錘狀，更換培養(yǎng)液棄去未貼壁細(xì)胞。此后每隔3d

8、換培養(yǎng)液。每天用倒置相差顯微鏡觀察培養(yǎng)瓶中細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)變化。約接種10d后，貼壁細(xì)胞近乎鋪滿整個(gè)培養(yǎng)皿底，細(xì)胞融合達(dá)90%時(shí)用0.25%的胰酶蛋白(含1mmol·L-1E