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《gst與戊型肝炎病毒orf2編碼蛋白融合表達形成的新抗原表位的鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、GST與戊型肝炎病毒ORF2編碼蛋白融合表達形成的新抗原表位的鑒定作者：梁久紅,梁立敏△,董敏,韓振格,董晨,孟繼鴻【摘要】 目的:以戊型肝炎病毒（HEV）ORF2編碼的重組蛋白p166為例,研究蛋白標簽GST對融合表達的重組蛋白抗原結(jié)構(gòu)的影響。方法:以HEV中國株重組蛋白p166Chn-GST為免疫原,制備單克隆抗體（mAb）,與代表HEV4個基因型的摩洛哥株、墨西哥株、美國株和中國株p166的GST或His融合蛋白、中國株非融合重組蛋白p179Chn以及GST融合的HEV無關(guān)蛋白進行ELI
2、SA檢測,鑒定mAb所識別的抗原表位。結(jié)果:獲得3株穩(wěn)定分泌抗p166Chn-GST的雜交瘤細胞株,分泌的mAb1A8、9B4和8H10與p166Chn-GST反應(yīng),與GST不反應(yīng)。其中1A8和9B4可與帶GST標簽的4種p166-GST蛋白以及N和C端截短的p146Chn-GST、p137Chn-GST反應(yīng),而不與4種p166-His蛋白反應(yīng),也不與p179Chn反應(yīng),與HEV病毒顆粒競爭試驗陰性,與GST融合的HEV無關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)性,表明1A8和9B4識別的抗原表位不是HEV病毒顆粒表面
3、天然存在的抗原表位,而是GST與HEVORF2編碼蛋白的465-601aa區(qū)段序列共同形成的新的抗原表位。結(jié)論:GST能夠賦予基因工程重組蛋白以新的抗原特性,它與融合表達的重組蛋白可以共同形成新的抗原表位?！娟P(guān)鍵詞】GST融合表達戊型肝炎病毒單克隆抗體抗原表位13 ［Abstract］AIM:ToinvestigatetheeffectofaGSTtagontheantigenicstructureofGSTfusion-expressedandORF2-encodedrecombinantp
4、roteinsofhepatitisEvirus(HEV).METHODS:Themonoclonalantibodies(mAb)werepreparedwithaGSTfusionprotein,p166Chn-GST,whichwasderivedfromaChineseHEVstrain.ThentheyweretestedbyindirectELISA,competitionELISAandWesternblotwithdifferentGSTfusion,Hisfusionornon
5、-fusionrecombinantproteinsderivedfromHEVreferencestrainsofall4genotypesandothernon-HEVrecombinantproteins.RESULTS:ThreemAbnamed1A8,9B4and8H10wereobtained.Allofthemreactedtop166Chn-GSTbutdidnotreacttoGST.mAb1A8and9B4reactedto4p166-GSTproteinsofdiffere
6、ntHEVgenotypesand2N-orC-terminaltruncatedp166Chn-GSTproteinsnamedp146Chn-GSTandp137Chn-GST,buttheydidnotreactto4p166-HisproteinsofdifferentHEVgenotypesandanon-fusionp179Chnprotein.Nodetectablesignalswerefoundwhen1A8and9B4weresubjectedtoHEVantigencomp
7、etitionELISAorWesternblotafterSDS-PAGE.NocrossreactionwasobservedbetweenthetwomAbandHEV-irrelevantGSTfusionproteins,either.CONCLUSION:AnovelantigenicepitoperecognizedbymAb1A8and9B4appearsontheGSTfusion-expressed13andORF2-encodedHEVrecombinantproteins
8、anditisdependentontheconformationalfoldingofbothGSTandHEVsequences. ?。跭eywords］GSTfusion-expression;hepatitisEvirus;monoclonalantibody;antigenicepitope 體外表達的基因工程重組蛋白能夠模擬微生物結(jié)構(gòu)或功能蛋白的生物學活性,因而在病原微生物研究的各個領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。為了正確折疊和方便制備的需要,重組蛋白常常與谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶（GST）、聚組氨酸（nH
