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《gst與戊型肝炎病毒orf2編碼蛋白融合表達(dá)形成的新抗原表位的鑒定》由會員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、GST與戊型肝炎病毒ORF2編碼蛋白融合表達(dá)形成的新抗原表位的鑒定:梁久紅,梁立敏△,董敏,韓振格,董晨,孟繼鴻【摘要】 目的:以戊型肝炎病毒(HEV)ORF2編碼的重組蛋白p166為例,研究蛋白標(biāo)簽GST對融合表達(dá)的重組蛋白抗原結(jié)構(gòu)的影響。方法:以HEV中國株重組蛋白p166Chn-GST為免疫原,制備單克隆抗體(mAb),與代表HEV4個基因型的摩洛哥株、墨西哥株、美國株和中國株p166的GST或His融合蛋白、中國株非融合重組蛋白p179Chn以及GST融合的HEV無關(guān)蛋白進(jìn)行ELISA檢測,鑒定mAb
2、所識別的抗原表位。結(jié)果:獲得3株穩(wěn)定分泌抗p166Chn-GST的雜交瘤細(xì)胞株,分泌的mAb1A8、9B4和8H10與p166Chn-GST反應(yīng),與GST不反應(yīng)。其中1A8和9B4可與帶GST標(biāo)簽的4種p166-GST蛋白以及N和C端截短的p146Chn-GST、p137Chn-GST反應(yīng),而不與4種p166-His蛋白反應(yīng),也不與p179Chn反應(yīng),與HEV病毒顆粒競爭試驗(yàn)陰性,與GST融合的HEV無關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)性,表明1A8和9B4識別的抗原表位不是HEV病毒顆粒表面天然存在的抗原表位,而是GST與HE
3、VORF2編碼蛋白的465-601aa區(qū)段序列共同形成的新的抗原表位。結(jié)論:GST能夠賦予基因工程重組蛋白以新的抗原特性,它與融合表達(dá)的重組蛋白可以共同形成新的抗原表位。【關(guān)鍵詞】GST融合表達(dá)戊型肝炎病毒單克隆抗體抗原表位 [Abstract]AIM:ToinvestigatetheeffectofaGSTtagontheantigenicstructureofGSTfusion-expressedandORF2-encodedrebinantproteinsofhepatitisEvirus(HEV).M
4、ETHODS:Themonoclonalantibodies(mAb)aChineseHEVstrain.ThentheyHEVreferencestrainsofall4genotypesandothernon-HEVrebinantproteins.RESULTS:ThreemAbnamed1A8,9B4and8H10reactedtop166Chn-GSTbutdidnotreacttoGST.mAb1A8and9B4reactedto4p166-GSTproteinsofdifferentHEVgeno
5、typesand2N-orC-terminaltruncatedp166Chn-GSTproteinsnamedp146Chn-GSTandp137Chn-GST,buttheydidnotreactto4p166-HisproteinsofdifferentHEVgenotypesandanon-fusionp179Chnprotein.NodetectablesignalsAbandHEV-irrelevantGSTfusionproteins,either.CONCLUSION:Anovelantigen
6、icepitoperecognizedbymAb1A8and9B4appearsontheGSTfusion-expressedandORF2-encodedHEVrebinantproteinsanditisdependentontheconformationalfoldingofbothGSTandHEVsequences. [Keyonoclonalantibody;antigenicepitope 體外表達(dá)的基因工程重組蛋白能夠模擬微生物結(jié)構(gòu)或功能蛋白的生物學(xué)活性,因而在病原微生物研究的各個領(lǐng)域應(yīng)用
7、廣泛。為了正確折疊和方便制備的需要,重組蛋白常常與谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)、聚組氨酸(nHis)等蛋白標(biāo)簽融合表達(dá)。但是融合表達(dá)也會帶來新的問題,可能改變目的蛋白的空間結(jié)構(gòu),影響其抗原性,甚至在用于抗體檢測時出現(xiàn)假陽性[1]。我們在研究戊型肝炎病毒(hepatitisEvirus,HEV)結(jié)構(gòu)蛋白抗原表位特征時,發(fā)現(xiàn)用帶GST標(biāo)簽的HEV重組蛋白p166Chn-GST制備的部分單克隆抗體(mAb)與帶His標(biāo)簽的p166Chn-His不反應(yīng)。為研究這些mAb所識別的抗原表位特征,我們應(yīng)用HEV不同基因型4個代
8、表株重組蛋白p166的GST融合蛋白和His融合蛋白、非融合蛋白p179Chn、GST融合的p166截短蛋白、與HEV無關(guān)的其他GST融合蛋白以及GST蛋白,作了仔細(xì)的抗原表位鑒定,證實(shí)GST可以和與它融合表達(dá)的重組蛋白共同形成新的抗原表位?! ?材料和方法 1.1材料pET-28a載體和大腸桿菌BL21菌株購自Novagen公司;Ni-NTA樹脂購自上海申能博彩生物制品公司;BAL