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1、總糖和還原糖的測定——斐林氏法2006-08-3000:00:00???來源：???評論：0??我要評論總糖和還原糖測定方法較多，如3，5—二硝基水楊酸法、堿性銅試劑法、蒽酮比色法、斐林氏法等。這里只介紹斐林氏法。一、目的學習掌握生產實踐中常用的快速定糖方法。二、原理還原糖在堿性溶液中能將Ag+，Hg+，Cu2+，Fe（CN）3-等金屬離子還原，而糖本身則氧化成各種羥酸，利用這一特性可總糖和還原糖測定方法較多，如3，5—二硝基水楊酸法、堿性銅試劑法、蒽酮比色法、斐林氏法等。這里只介紹斐林氏法。一、目的學習掌握生產實踐中常用的快速定糖方法。二、原理還原糖在堿性溶液中能將Ag+，H
2、g+，Cu2+，Fe（CN）3-等金屬離子還原，而糖本身則氧化成各種羥酸，利用這一特性可以對還原糖進行定量測定。本實驗采用斐林試劑熱滴定法，氧化劑是斐林試劑，它是由甲乙兩種溶液組成，甲液中含有硫酸銅、次甲基藍；乙液中含有氫氧化鈉、酒石酸鉀鈉和亞鐵氰化鉀（黃血鹽）。當甲乙兩液混合時，硫酸銅和氫氧化鈉作用形成氫氧化銅沉淀，由于溶液中存在酒石酸鉀鈉，它和氫氧化銅形成了可溶性絡合物。酒石酸絡銅（Ⅱ）鉀鈉鹽在與還原糖共熱時，二價銅離子即被還原成一價的氧化亞銅紅色沉淀。此氧化亞銅與試劑中亞鐵氰化鉀反應生成可溶性的亞鐵氰酸絡銅（Ⅰ）鉀鹽。Cu2O+K4Fe(CN)6+3H2O→K2Cu2Fe
3、(CN)6+2KOH+2H2O亞鐵氰化鉀亞鐵氰酸絡銅（Ⅰ）鉀鹽斐林試劑中二價銅的還原力比次甲基藍強，因此所滴入的標準葡萄糖溶液首先使二價銅還原，只有當二價銅被還原完畢后，才能使次甲基藍（甲烯藍）還原為無色，測定中以此作為滴定終點。在測定時先做一對照管（不加樣品），用標準葡萄糖滴定求知一定體積斐林試劑中二價銅和次甲基藍的量，即測定對照管消耗的標準葡萄糖量（A）。再做樣品管，樣品中還原糖消耗斐林試劑中一部分二價銅，剩余的量再用標準葡萄糖來滴定，即樣品消耗的標準葡萄糖量（B）。將（A）減去（B）就可求得樣品中還原糖量。三、器材及試劑：1．器材：①山芋粉②廣范試紙pH1～12。③吸管5
4、毫升（×4），10毫升（×2）④容量瓶100毫升（×3）⑤燒杯150毫升（×1），100毫升（×1）⑥三角燒瓶250毫升（×6）⑦滴定管25毫升（×1）⑧雙孔橡皮塞⑨電爐300W（×1）⑩天平。2．試劑①斐林氏甲液：15克硫酸銅、0.05克次甲基藍溶于1升蒸餾水中。②斐林氏乙液：50克酒石酸鉀鈉、54克氫氧化鈉、4克亞鐵氰化鉀溶于1升蒸餾水中。③0.1%標準葡萄糖溶液：準確稱取干燥恒重的葡萄糖1.00克，加入少量蒸餾水溶解后，再加8毫升濃鹽酸（防止微生物生長），蒸餾水定容至1升。④6mol·L-1鹽酸；⑤6mol·L-1氫氧化鈉。四、操作步驟1．還原糖提取：稱取2.00克山芋粉
5、，在小燒杯中先用少量水調成糊狀，再加入70毫升水，50℃保溫15分鐘，取出后定容至100毫升，經過濾，取濾液進行還原糖測定。2．總糖水解：稱取1.00克山芋粉在小燒杯中，加6mol·L-1鹽酸10毫升，蒸餾水15毫升，在沸水浴上加熱半小時，取出后用6mol·L-1氫氧化鈉中和至中性，然后定容至100毫升，經過濾，取濾液10毫升稀釋至100毫升，即為稀釋1000倍的總糖水解液。3．糖的定量測定：按圖1-1裝置熱滴定儀器。在三角瓶中按下表加入各試劑。在加入斐林試劑甲液和乙液后，為了保證處于沸騰狀態(tài)下快速滴定（整個滴定時間在三分鐘內完成），在滴定前先從滴定管中加入適量的葡萄糖液，然后
6、在沸騰狀態(tài)下以4～5秒一滴的速度，繼續(xù)自滴定管加入葡萄糖液，直至藍色消失停止滴定。由于還原型的次甲基藍遇到空氣后又能轉為氧化型，而恢復藍色，因此當滴定到藍色剛消失，出現黃色時應立即停止滴定，如果再現藍色切勿繼續(xù)滴定。五、計算：相關熱詞搜索：總糖還原糖斐林氏法上一篇：用溫度敏感型啟動子表達系統表達目的基因下一篇：轉氨作用延伸閱讀：··還原糖和總糖的測定3,5-二硝基水楊酸比色法(2008-05-21)··費林試劑法測定總糖(2006-09-23)··植物組織中總糖及還原糖的測定—3,5-二硝基水楊酸比色法(2006-09-12)··總糖和還原糖的測定:3,5－二硝基水楊酸法(20
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