米非司酮對(duì)體外培養(yǎng)子宮肌瘤細(xì)胞作用的形態(tài)學(xué)觀察

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1、【摘要】目的觀察不同濃度米非司酮作用下體外培養(yǎng)的子宮肌瘤細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，尋找治療子宮肌瘤的最佳米非司酮濃度。方法光鏡及電鏡下觀察不同濃度米非司酮(10-8～10-4mol/L)下體外培養(yǎng)的子宮肌瘤細(xì)胞的其形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果10-8～10-7mol/L米非司酮對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)影響，10-6mol/L以上濃度肌瘤細(xì)胞萎縮，10-4mol/L抑制作用最強(qiáng)。結(jié)論米非司酮破壞肌瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)，干擾核膜、胞膜、細(xì)胞器、及染色體，并與米非司酮濃度成正相關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】體外培養(yǎng);子宮肌瘤細(xì)胞;米非司酮;形態(tài)學(xué)　【Abstract】ObjectiveToobserv

2、ethemorphologicalchangesofthehumanleiomyomacellsculturedinthepresenceofmifepristone,andtoexploretheoptimalconcentrationoftreatingleiomyomawithmifepristone.MethodsThemorphologicalchangesofthecellswereobservedundermicroscopeandelectronmicroscope.ResultsTheinhibitoryeffectof

3、mifepristoneonthecellswasonlyexpressedwhentheconcentrationofmifepristonewasrelativelyhigh(10-6mol/L),andthecellbegantoregression.ConclusionMifepristionemaydestroythestrutureofleiomyomacellsandinterferethemembraneofcellandnuclei,organsofcell,chromosome.Theinhibitoryeffecto

4、fmifepristoneonhumanleiomyomacellsinvitroisconcentrationdependent.　　【Keywords】cultureinvitro;uterineleiomyoma;mifepristone;morphology　　子宮肌瘤是激素依賴性腫瘤已被公認(rèn)，抗孕激素制劑米非司酮用于治療子宮肌瘤已取得一定療效，但肌瘤縮小程度差異較大，從0%～80%不等[1]，故人們對(duì)米非司酮治療子宮肌瘤機(jī)制進(jìn)行了不同層面的研究。本研究采用子宮肌瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)法加入不同濃度的米非司酮，用電鏡及光鏡觀察其結(jié)構(gòu)變化

5、，以了解米非司酮縮瘤的機(jī)制，并為臨床應(yīng)用米非司酮治療子宮肌瘤時(shí)劑量的選擇提供參考依據(jù)?！　?材料與方法　　1.1標(biāo)本來(lái)源　　2009年2至6月在天津市第三中心醫(yī)院手術(shù)室行子宮肌瘤剝除及子宮切除17例患者的肌瘤組織，患者年齡40～55歲，并且確認(rèn)術(shù)前3個(gè)月未服用過(guò)激素類(lèi)藥物。根據(jù)月經(jīng)周期和病理診斷確定子宮內(nèi)膜分期，且組織學(xué)診斷確診子宮肌瘤，并未發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜有病理性改變，其中增生期15例，分泌期2例?！　?.2方法　　1.2.1子宮肌瘤細(xì)胞分離與原代培養(yǎng):將新鮮的肌瘤組織剪碎成1mm3小塊，5g組織加入細(xì)胞生長(zhǎng)液與細(xì)胞消化液2∶1的混合液20

6、ml中消化，過(guò)目篩網(wǎng)除去未消化的組織，離心，得到純化的子宮平滑肌瘤細(xì)胞。用0.04%臺(tái)盼藍(lán)染色行活細(xì)胞計(jì)數(shù)，觀察細(xì)胞活力約90%，用細(xì)胞生長(zhǎng)液調(diào)整細(xì)胞種植濃度為2×105/ml，混勻后接種于24孔培養(yǎng)板中，每孔接種2ml，置37℃5%CO2恒溫孵育箱中培養(yǎng)，每2～3天換液1次。　　1.2.2米非司酮對(duì)肌瘤細(xì)胞體外生長(zhǎng)的作用:取同批培養(yǎng)成單層生長(zhǎng)至融合狀態(tài)的細(xì)胞(5～7d)，加入米非司酮濃度10-8～10-4locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassi

7、nation.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcamemol/L,每天記錄觀察細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)情況，并及時(shí)照相。每組均設(shè)對(duì)照，對(duì)照組加入等體積無(wú)水乙醇?！　?.2.3米非司酮作用后的肌瘤細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)：用1∶1的2%乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)及0.05%的胰蛋白酶2ml加入培養(yǎng)3d細(xì)胞的孔板中消化，離心制成細(xì)胞團(tuán)，2.5%戊二醛

8、固定，PBS液漂洗，10%四氧化鋨后固定，乙醇逐級(jí)脫水，Epon812環(huán)氧樹(shù)脂包埋。LKBNOVE型超薄切片機(jī)切片，厚度為50～70nm，經(jīng)醋酸鈾和檸檬酸鉛染色后，JEOL1010透射電鏡