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《大鼠急性腎缺血再灌注對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣水平與細(xì)胞凋亡的影響.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、大鼠急性腎缺血再灌注對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣水平與細(xì)胞凋亡的影響【摘要】目的：觀察缺血再灌注損傷對(duì)腎細(xì)胞游離鈣（〔Ca2+〕i）水平和細(xì)胞凋亡的影響。方法：采用摘除大鼠左腎，鉗夾右側(cè)腎蒂的方法，建立急性缺血再灌注腎損傷模型，應(yīng)用Fura-2/AM熒光指示劑測(cè)定缺血再灌注大鼠腎細(xì)胞〔Ca2+〕i水平，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腎細(xì)胞凋亡率。結(jié)果：缺血再灌注不同時(shí)期腎細(xì)胞呈現(xiàn)不同程度Ca2+超載，與對(duì)照組相比差異顯著（P<0.01）；腎細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組相比差異顯著（P<0.05）。結(jié)論：缺血再灌注不同時(shí)期腎細(xì)胞呈
2、現(xiàn)Ca2+超載現(xiàn)象并與腎細(xì)胞凋亡率有正相關(guān)趨勢(shì)，再灌注時(shí)間與腎細(xì)胞Ca2+超載呈正相關(guān)，提示再灌注損傷在加重細(xì)胞鈣超載同時(shí)增加了腎組織細(xì)胞凋亡，可能是再灌注損傷腎功能障礙的重要原因?！娟P(guān)鍵詞】缺血再灌注；腎組織；細(xì)胞鈣超載；細(xì)胞凋亡〔Abstract〕ObjectiveTostudytheeffectofrenalischemicreperfusioninjuryontracellularinonizedcalciumlevelandapoptosis.MethodsThemodelofrat's
3、acuterenalischemicreperfusioninjurywasestablished.Renalintracellular〔Ca2+〕ilevelwasdeterminedbyFura-2/AMfluorescenceassay,andrenalcellapoptosiswasmeasuredbyflowcytometry.ResultsComparedwithcontrolgroup,renalintracellular〔Ca2+〕ilevelincreasedsignifican
4、tly(P<0.01)andapoptosisrateincreasedsignificantly(P<0.05)atdifferentperiodofischemicreperfusion.ConclusionAtdifferentperiodofrat'sacuterenalischemicreperfusioninjury,renalintracellular〔Ca2+〕ioverloadingandtherateofapoptosiswererelevant.Reperfusi
5、ontimeandrenalintracellular〔Ca2+〕ioverloadingwererelevant,whichsuggestedthatthereperfusioninjurymightaggregateoverloadofintracellular〔Ca2+〕ibydifferentmechanisms.腎缺血再灌注損傷綜合征是公認(rèn)的移植腎重要的致病因子，不但與移植腎功能延遲恢復(fù)的發(fā)生密切相關(guān)，而且也與腎移植術(shù)后急性和慢性排斥反應(yīng)的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)[1]。腎缺血再灌注損傷的發(fā)生
6、機(jī)制，涉及諸多因素，其中細(xì)胞內(nèi)鈣代謝紊亂占有相當(dāng)重要的位置，可能與急性缺血缺氧造成細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)障礙及細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)改變有關(guān)。另外，急性缺血缺氧會(huì)引起細(xì)胞的急慢性損傷、死亡和細(xì)胞凋亡。細(xì)胞內(nèi)游離鈣（Ca2+）是介導(dǎo)細(xì)胞生理與病理作用的重要信使，其濃度異常升高會(huì)引起細(xì)胞的急慢性損傷和死亡，還可引起組織細(xì)胞的氧化侵襲。因此，本實(shí)驗(yàn)擬就缺血再灌注不同時(shí)期腎細(xì)胞內(nèi)鈣含量（〔Ca2+〕i）和腎細(xì)胞凋亡水平進(jìn)行研究，為探討缺血再灌注損傷的發(fā)生機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料與方法51.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及主要試劑1.1.1動(dòng)物
7、分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物系白求恩醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供，為封閉群動(dòng)物。取雄性（避免雌激素對(duì)缺血的調(diào)節(jié)作用）Wistar大鼠30只，體重200~250g。隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組（Ⅰ組）、缺血1h組（Ⅱ組）、再灌注1h組（Ⅲ組）、再灌注2h組（Ⅳ組）和再灌注24h組（Ⅴ組）。1.1.2試劑Fura-2/AM購(gòu)自Calbiochem公司。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1手術(shù)方法及取材將Wistar大鼠在20%烏拉坦（按1g·kg-1，iv）麻醉下進(jìn)行手術(shù)。腹中線切口，左腎靜脈穿刺取血，摘除左腎，以避免健側(cè)的代償作用。Ⅰ組：?jiǎn)?/p>
8、純切除左腎，分離右腎動(dòng)脈、靜脈，不夾閉右腎動(dòng)靜脈，作為假手術(shù)對(duì)照組；Ⅱ組：夾閉右腎動(dòng)靜脈1h，取右腎作為再灌注損傷陰性對(duì)照組。夾閉腎動(dòng)靜脈1h去除動(dòng)靜脈夾，靜脈補(bǔ)給生理鹽水20mL。恢復(fù)血流再灌注1h（Ⅲ組）；2h（Ⅳ組）和24h（Ⅴ組）取右腎，同時(shí)留取血液做腎功能檢測(cè)。腎上極組織做光鏡和電鏡檢查，其余腎組織按實(shí)驗(yàn)要求處理。1.2.2腎細(xì)胞游離鈣濃度（〔Ca2+〕i）測(cè)定用熒光標(biāo)記探針Fura-2/AM標(biāo)記Ca2+，熒光分光光度儀（日本，F(xiàn)4010型）檢測(cè)[2]。1.2.3細(xì)胞凋亡
