大鼠急性腎缺血再灌注對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣水平與細(xì)胞凋亡的影

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1、大鼠急性腎缺血再灌注對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣水平與細(xì)胞凋亡的影【摘要】目的：觀察缺血再灌注損傷對(duì)腎細(xì)胞游離鈣（〔Ca2+〕i）水平和細(xì)胞凋亡的影響。方法：采用摘除大鼠左腎，鉗夾右側(cè)腎蒂的方法，建立急性缺血再灌注腎損傷模型，應(yīng)用Fura-2/AM熒光指示劑測(cè)定缺血再灌注大鼠腎細(xì)胞〔Ca2+〕i水平，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腎細(xì)胞凋亡率。結(jié)果：缺血再灌注不同時(shí)期腎細(xì)胞呈現(xiàn)不同程度Ca2+超載，與對(duì)照組相比差異顯著（P<0.01）；腎細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組相比差異顯著（P<0.05）。結(jié)論：缺血再灌注不同時(shí)期腎細(xì)胞呈現(xiàn)Ca2+超載現(xiàn)象并與腎細(xì)胞凋亡率有正相關(guān)趨勢(shì)，再灌注時(shí)間與腎細(xì)胞Ca2+超載呈正相關(guān)，提示再灌注

2、損傷在加重細(xì)胞鈣超載同時(shí)增加了腎組織細(xì)胞凋亡，可能是再灌注損傷腎功能障礙的重要原因?！娟P(guān)鍵詞】缺血再灌注；腎組織；細(xì)胞鈣超載；細(xì)胞凋亡〔Abstract〕ObjectiveTostudytheeffectofrenalischemicreperfusioninjuryontracellularinonizedcalciumlevelandapoptosis.MethodsThemodelofrat'sacuterenalischemicreperfusioninjuryinedbyFura-2/AMfluorescenceassay,andrenalcellapoptosiseasuredb

3、yfloetry.Resultsparedicreperfusion.ConclusionAtdifferentperiodofrat'sacuterenalischemicreperfusioninjury,renalintracellular〔Ca2+〕ioverloadingandtherateofapoptosiseandrenalintracellular〔Ca2+〕ioverloadingightaggregateoverloadofintracellular〔Ca2+〕ibydifferentmechanisms.腎缺血再灌注損傷綜合征是公認(rèn)的移植腎重要的致病因子，不但與移植腎

4、功能延遲恢復(fù)的發(fā)生密切相關(guān)，而且也與腎移植術(shù)后急性和慢性排斥反應(yīng)的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)[1]。腎缺血再灌注損傷的發(fā)生機(jī)制，涉及諸多因素，其中細(xì)胞內(nèi)鈣代謝紊亂占有相當(dāng)重要的位置，可能與急性缺血缺氧造成細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)障礙及細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)改變有關(guān)。另外，急性缺血缺氧會(huì)引起細(xì)胞的急慢性損傷、死亡和細(xì)胞凋亡。細(xì)胞內(nèi)游離鈣（Ca2+）是介導(dǎo)細(xì)胞生理與病理作用的重要信使，其濃度異常升高會(huì)引起細(xì)胞的急慢性損傷和死亡，還可引起組織細(xì)胞的氧化侵襲。因此，本實(shí)驗(yàn)擬就缺血再灌注不同時(shí)期腎細(xì)胞內(nèi)鈣含量（〔Ca2+〕i）和腎細(xì)胞凋亡水平進(jìn)行研究，為探討缺血再灌注損傷的發(fā)生機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及主要試

5、劑1.1.1動(dòng)物分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物系白求恩醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供，為封閉群動(dòng)物。取雄性（避免雌激素對(duì)缺血的調(diào)節(jié)作用）購(gòu)自Calbiochem公司。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1手術(shù)方法及取材將標(biāo)記Ca2+，熒光分光光度儀（日本，F(xiàn)4010型）檢測(cè)[2]。1.2.3細(xì)胞凋亡檢測(cè)細(xì)胞凋亡率檢測(cè)采用流式細(xì)胞儀（美國(guó)Coulter公司ILIT-Ⅱ型）檢測(cè)。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS8.0統(tǒng)計(jì)軟件，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)用x±s表示，組間分析采用方差分析和q檢驗(yàn)。相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析法。2結(jié)果2.1缺血再灌注腎組織病理改變?nèi)庋塾^腎組織在急性缺血及再灌注后腎皮髓質(zhì)微白并有輕度腫脹，余未見(jiàn)明顯大體改變。①光鏡下病

6、理改變：急性缺血及再灌注1h組即可見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生腫脹、變性；再灌注2h和24h組見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞腫脹加劇，小管腔變窄，并出現(xiàn)上皮細(xì)胞壞死，腎小球基底膜增厚。②電鏡結(jié)果：急性缺血再灌注腎組織出現(xiàn)系列損傷性變化，近曲腎小管發(fā)生變性、小管腔表面微絨毛減少或消失、甚至發(fā)生溶解壞死；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒擴(kuò)張呈空泡狀、線粒體腫脹畸形、嵴斷裂（圖1）；膜性細(xì)胞器發(fā)生髓樣變性；微血管腔明顯縮小或內(nèi)皮細(xì)胞溶解；腎小球3層膜明顯增厚，足突融合或消失等改變（圖2）。對(duì)照組腎組織細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)未見(jiàn)異常改變。2.2缺血再灌注后腎功能的改變急性缺血再灌注損傷后腎臟功能有不同程度改變，本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)以血清Cr和BUN水平作為評(píng)價(jià)腎

7、功能的檢測(cè)指標(biāo)。在急性缺血和再灌注早期（再灌注1~2h），腎損傷改變明顯，與對(duì)照組相比血清Cr和BUN明顯增高（P<0.01），再灌注晚期（24h）,腎功能未見(jiàn)明顯改善，與對(duì)照組相比損傷仍很明顯（t=3.32，P<0.05），見(jiàn)表1。2.3急性缺血及再灌注對(duì)腎細(xì)胞（〔Ca2+〕i）的影響應(yīng)用熒光分光光度儀檢測(cè)急性缺血及再灌注損傷腎細(xì)胞（〔Ca2+〕i）均明顯增高（t=3.489~7.74，P<