分枝桿菌屬細菌檢驗醫(yī)學ppt

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1、微生物學檢驗分枝桿菌屬、諾卡菌屬、放線菌屬鑒定返回總目錄本章內(nèi)容第一節(jié)分枝桿菌屬12第三節(jié)放線菌屬3第二節(jié)諾卡菌屬學習目標及重點學習目標：1.掌握結(jié)核分枝桿菌生物學特征，痰涂片抗酸染色及報告。2.熟悉結(jié)核菌素試驗的臨床意義；結(jié)核分枝桿菌和麻風分枝桿菌；星形諾卡菌的鑒別要點，諾卡菌與分枝桿菌、棒狀桿菌的鑒別。3.了解結(jié)核分枝桿菌的致病物質(zhì)；麻風分枝桿菌致病性；放線菌屬的生物學特性、致病及免疫性本章重點：★結(jié)核分枝菌的生物學特性、培養(yǎng)特性★結(jié)核分枝菌的微生物學檢驗★結(jié)核分枝菌與其他分枝菌的鑒別第一節(jié)分枝桿菌屬分枝桿菌屬（Mycobacterium）概述是一類細長彎曲的桿菌，因有分枝生長的

2、趨勢而得名主要特點細長彎曲，分枝狀生長細胞壁含有大量脂質(zhì)（分枝菌酸）常用抗酸染色鑒定，呈抗酸染色陽性（紅色）引起疾病多呈慢性，且伴肉芽腫一、結(jié)核分枝菌(一)生物學性狀1.形態(tài)與染色：G+（不易著色），細長略彎，分枝狀，有莢膜，抗酸染色陽性。菌體外有莢膜2.培養(yǎng)特性營養(yǎng)要求較高，最適pH6.5～6.8，在羅氏（Lowenstein-Jensen，L-J）培養(yǎng)基上生長良好生長緩慢，14～18h分裂1次，在固體培養(yǎng)基上2～5w才出現(xiàn)肉眼可見的菌落典型菌落為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，如菜花樣第一節(jié)分枝桿菌屬結(jié)核菌抗酸染色結(jié)果結(jié)核菌菌落第一節(jié)分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌３.

3、生化反應(yīng)不發(fā)酵糖類，觸酶試驗陽性，而熱觸酶試驗陰性——加熱68℃散失活性（區(qū)別非結(jié)核菌）煙酸合成試驗、硝酸鹽還原試驗、吡嗪酰胺試驗均陽性，可與牛型結(jié)核分枝菌鑒別４.抵抗力對乙醇、濕熱、紫外線、抗結(jié)核藥物（鏈霉素、異煙肼、利福平等）敏感對干燥、酸（3%HCl或6%H2SO4)或堿（4%NaOH)、堿性染料（孔雀綠、結(jié)晶紫）、青霉素等抗生素等有抵抗力第一節(jié)分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌５.變異性（１）形態(tài)結(jié)構(gòu)變異：結(jié)核桿菌的L型：顆粒狀（Much顆?！≡钪懈锾m陽性非抗酸性）、絲狀（２）毒力變異：卡介苗(BCG)：Calmette和Guérin將牛型分枝桿菌經(jīng)13年230次傳代而獲得的減毒菌

4、株——活疫苗（３）耐藥性變異：耐異煙肼及其他抗結(jié)核藥物的結(jié)核菌株日益增多第一節(jié)分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌（二）微生物檢驗1.標本：根據(jù)感染部位的不同來采集不同的標本，最常用痰液標本2.標本前處理目前有酸（4%HCl）處理和堿（4%NaOH）處理兩種方法3.檢驗程序第一節(jié)分枝桿菌屬標本核酸檢測接種固體培養(yǎng)基可疑菌落涂片抗酸染色鏡檢抗體檢測慢性生長菌快速生長菌菌種鑒定標本前處理接種液體培養(yǎng)基接種小白鼠豚鼠臟器涂片鏡檢抗酸染色鑒定試驗檢驗程序第一節(jié)分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌4.形態(tài)學檢查（高壓滅菌后進行）（1）直接涂片染色鏡檢（2）濃縮集菌涂片檢查法（3）熒光染色：觀察形態(tài)黃綠色、橙色熒光（4

5、）初步報告：檢出抗酸分枝桿菌（結(jié)核桿菌？）第一節(jié)分枝桿菌屬報告方式抗酸染色鏡檢結(jié)果-仔細檢查300個視野未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌±300個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1~2條抗酸菌＋100個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1~9條抗酸菌2＋10個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1~9條抗酸菌3＋每個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1~9條抗酸菌4＋每個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)9條以上抗酸菌一、結(jié)核分枝菌（5）報告方式第一節(jié)分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌5.分離培養(yǎng)L-J斜面或平板：生長緩慢，涂片抗酸染色快速培養(yǎng)系統(tǒng)：自動報告6.核酸檢測：PCR法第一節(jié)分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌(三)臨床意義1.致病物質(zhì)：主要與菌體成份有關(guān)。（1）脂質(zhì)分枝菌酸：與抗酸性有關(guān)蠟質(zhì)D:具有佐劑作用硫酸腦苷脂:阻礙吞噬磷

6、脂:促類上皮細胞形成索狀因子:與該菌毒力有密切關(guān)系第一節(jié)分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌（2）蛋白質(zhì)誘發(fā)超敏反應(yīng)（3）糖類抵抗吞噬作用2.所致疾?。?）經(jīng)多途徑感染，引起全身各組織結(jié)核病，以肺結(jié)核最多見（2）類型原發(fā)感染和繼發(fā)感染3.免疫性抗結(jié)核免疫以細胞免疫為主※抗結(jié)核免疫屬帶菌免疫或稱傳染性免疫※抗結(jié)核免疫與Ⅳ型超敏反應(yīng)同時出現(xiàn)第一節(jié)分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌4.結(jié)核菌素試驗（1）原理用結(jié)核菌素進行皮膚試驗，以檢測受試者對結(jié)核桿菌是否有細胞免疫及遲發(fā)型超敏反應(yīng)的試驗。（2）結(jié)核菌素試劑（PPD5單位）舊結(jié)核菌素（oldtuberculin，OT)，純蛋白衍化物(purifiedprotei

7、nderivative，PPD)（3）結(jié)果48h-72h,根據(jù)注射部位是否出現(xiàn)紅腫判斷結(jié)果＜5mm為陰性≥5mm為陽性＞15mm為強陽性第一節(jié)分枝桿菌屬一、結(jié)核分枝菌（4）結(jié)核菌素試驗意義選擇卡介苗接種對象、測定卡介苗接種后的免疫效果了解人群結(jié)核菌的自然感染率作為嬰幼兒結(jié)核病的輔助診斷測定腫瘤患者的細胞免疫功能第一節(jié)分枝桿菌屬二、麻風分枝菌1.生物學特性1873年挪威學者ArmauerHansen從麻風患者皮膚結(jié)節(jié)中發(fā)現(xiàn)，又名Hansen桿菌，具抗酸性細胞