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1、治療劑量高壓氧對(duì)胎鼠及新生鼠視網(wǎng)膜血管的影響論文王彥林，肖小敏，丁琦，王雪梨【摘要】目的:探討臨床治療劑量高壓氧（HBO）對(duì)胎鼠及新生鼠視網(wǎng)膜的影響.方法:SD新生大鼠，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)1～3組、對(duì)照組（常壓空氣組）及ROP模型組各5只，實(shí)驗(yàn)1組于孕鼠分娩前單純予治療劑量的HBO5d（2ATA，800mL/LO2，1h）、實(shí)驗(yàn)2組新生大鼠不僅予宮內(nèi)HBO.freelL/LO2，1h）連續(xù)5d；對(duì)照組置于常壓空氣中；ROP模型組第7d常壓吸氧（800mL/L）5d，然后吸空氣.全部新生大鼠于17d制作視網(wǎng)膜組織切片，計(jì)數(shù)突破視網(wǎng)膜
2、內(nèi)界膜的細(xì)胞核數(shù)目及免疫組織化學(xué)方法測(cè)定血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）在視網(wǎng)膜的表達(dá).結(jié)果:實(shí)驗(yàn)1～3組突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的細(xì)胞核數(shù)目與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）,ROP模型組與對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)1～3組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（37.9±6.1vs1.4±0.9,1.6±1.1,1.4±0.8,P0.01）.實(shí)驗(yàn)各組及對(duì)照組的VEGF的表達(dá)均以弱陽(yáng)性為主，均弱于ROP模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）.結(jié)論:臨床治療劑量高壓氧對(duì)胎鼠及新生鼠視網(wǎng)膜無(wú)影響.【關(guān)鍵詞】高壓氧；早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜??；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；視網(wǎng)膜血管
3、；動(dòng)物模型0引言近年來(lái)，高壓氧作為一種較新的治療手段走上了圍產(chǎn)科治療的舞臺(tái)，在胎兒生長(zhǎng)受限、胎兒宮內(nèi)窘迫以及預(yù)防新生兒缺血缺氧性腦病等方面頗有療效［1-2］.然而治療劑量的HBO帶給組織器官的高氧濃度是否會(huì)引起胎兒尚未成熟的視網(wǎng)膜發(fā)生氧毒性損傷，導(dǎo)致新生兒發(fā)生早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病（retinopathyofprematurity,ROP）一直是國(guó)內(nèi)外擔(dān)心的問(wèn)題，目前大多數(shù)觀點(diǎn)認(rèn)為HBO治療對(duì)視力無(wú)影響，但其結(jié)論多僅通過(guò)眼科隨訪獲得［1］.我們通過(guò)模擬臨床HBO對(duì)圍產(chǎn)兒的治療情況，通過(guò)計(jì)數(shù)突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的細(xì)胞核數(shù)目及VEGF的表達(dá)
4、來(lái)探討治療劑量高壓氧對(duì)胎鼠及新生鼠視網(wǎng)膜的影響.1材料和方法1.1材料SD成年雌鼠40只，雄鼠20只，由廣東省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，按2∶1同籠.每天早晨檢查陰道涂片，用沾有生理鹽水的棉簽取陰道分泌物，涂抹到預(yù)先放有生理鹽水的載波片上，鏡檢發(fā)現(xiàn)精子，算為孕期的第零天.選擇受孕的20只孕鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（HBO組，n=10）和常壓空氣組（n=10）.醫(yī)用多人空氣加壓艙，型號(hào)NG280900，浙江寧波高壓氧艙總廠制造.1.2方法實(shí)驗(yàn)組孕鼠于妊娠16d進(jìn)入高壓氧艙內(nèi)，置于密閉塑料氣囊中，由測(cè)氧儀監(jiān)控氣囊內(nèi)氧濃度達(dá)800mL/L，氧艙
5、壓力0.2MPa(表壓)，加壓10～15min，穩(wěn)壓期60min，緩慢減壓10～15min出艙，其后打開氣囊，暴露于正?？諝庵校刻?次，連續(xù)5d.常壓空氣組孕鼠只置于常壓空氣中.全部孕鼠于21d分娩，HBO組母鼠所產(chǎn)新生存活大鼠隨機(jī)選擇10只分配到實(shí)驗(yàn)1組（n=5）和實(shí)驗(yàn)2組（n=5）.常壓空氣組母鼠所產(chǎn)新生存活大鼠隨機(jī)選擇15只分配到實(shí)驗(yàn)3組（n=5）、對(duì)照組（n=5）及ROP模型組（n=5），期間如有新生鼠死亡，則另外選取妊娠大鼠補(bǔ)充.實(shí)驗(yàn)1,3組新生大鼠于出生7d起置于HBO下1h（2ATA，800mL/LO2），連
6、續(xù)5d后置于常壓空氣中5d；實(shí)驗(yàn)2組及對(duì)照組新生大鼠置于常壓空氣中.ROP模型組新生大鼠按Smith提供的方法建立ROP模型：將7d的大鼠先置800mL/LO2中飼養(yǎng)5d，然后在空氣中繼續(xù)飼養(yǎng).1.2.1視網(wǎng)膜血管計(jì)數(shù)將各組新生大鼠于出生17d頸椎脫臼處死，各組5只10只共計(jì)50只眼，標(biāo)記方向并編號(hào)，置于40g/L多聚甲醛中固定24h以上，常規(guī)脫水石蠟包埋，矢狀面平行視神經(jīng)連續(xù)6μm切面，每只眼均勻間斷抽取10個(gè)切面（有視神經(jīng)斷面的切面不計(jì)入在內(nèi)）雪夫高碘酸蘇木素染色，顯微鏡下計(jì)數(shù)突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞［3］.1.2.2
7、視網(wǎng)膜VEGF表達(dá)的檢測(cè)從每組各隨機(jī)抽取20張未經(jīng)染色的6μm視網(wǎng)膜切片，采用EnVisionTM二步法，VEGF兔抗大鼠mAb由北京中山生物工程有限公司提供.VEGF兔抗大鼠mAb工作濃度為:1∶50.以細(xì)胞質(zhì)著淡黃色至棕褐色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性染色采用半定量分級(jí)，每張切片選取5個(gè)不重復(fù)的高倍視野（400倍）計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞的平均數(shù)，陽(yáng)性細(xì)胞≤25%為┼,26%～50%為,51%～74%為,≥75%為.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用方差分析及LSDt檢驗(yàn)比較各組突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的細(xì)胞核數(shù)目，VEGF的表達(dá)采用等級(jí)資料表示，利用秩和檢
8、驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.2結(jié)果2.1視網(wǎng)膜血管計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)1～3組新生鼠突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目分別為1.4±0.9，1.6±1.1和1.4±0.8，與對(duì)照組1.2±0.9相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.39，1.89，0.92；P=0.165，0.06，0.359）,ROP模型組為37.
