實(shí)驗(yàn)3直接滴定法測還原糖

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1、食品分析實(shí)驗(yàn)主講：邱朝坤/吉義平/付曉燕電話：81730674辦公室：忘荃1029還原性糖概念：還原糖是指具有還原性的糖類。在糖類中，分子中含有游離醛基和酮基的單糖和含有游離醛基的二糖都具有還原性。還原糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麥芽糖等。非還原糖有蔗糖、淀粉、纖維素等，但它們都可以通過水解生成相應(yīng)的還原性單糖。所以糖類的測定是以還原糖的測定為基礎(chǔ)的。1.實(shí)驗(yàn)原理將一定量的堿性酒石酸銅甲、乙液等量混合，立即生成天藍(lán)色的氫氧化銅沉淀，這種沉淀很快與酒石酸鉀鈉反應(yīng)，生成深藍(lán)色的可溶性酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物。在加熱條件下，以次甲基藍(lán)作為指示劑，用樣液滴定，實(shí)驗(yàn)三：還原糖的測定（直

2、接滴定法）樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應(yīng)，生成紅色的氧化亞銅沉淀，待二價(jià)銅全部被還原后，稍過量的還原糖把次甲基藍(lán)還原，溶液由藍(lán)色變?yōu)闊o色，即為滴定終點(diǎn)。根據(jù)樣液消耗量可計(jì)算還原糖含量。（1）Cu·SO4+2NaOH=2Cu(OH)2+Na2SO4Cu(OH)2+COOKCHOHCOONaCHOH（2）=COOKCHOCOONaCHO＞Cu+2H2O（3）=COOKCHOCOONaCHO＞Cu+3Cu2OCHO(CHOH)4CH2OH+COOH(CHOH)3CH2OH6+6H2OCOOKCHOHCOONaCHOH+6+H2CO3（4）2.適用范圍與特點(diǎn)本法又稱快速法，其特點(diǎn)是

3、試劑用量少，操作和計(jì)算都比較簡便、快速，滴定終點(diǎn)明顯，適用于各類食品中還原糖的測定。但測定醬油、深色果汁等樣品時(shí)，因色素干擾，滴定終點(diǎn)常常模糊不清，影響準(zhǔn)確性。本法是國家標(biāo)準(zhǔn)分析方法。3.實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑實(shí)驗(yàn)材料：蘋果儀器：分析天平、研缽、電爐、鐵架臺(tái)、錐形瓶、漏斗、燒杯、玻棒、容量瓶、移液管、酸式滴定管。試劑：（1）堿性酒石酸銅甲液：稱取15g硫酸銅(CuSO4·5H2O)及0.05g次甲基藍(lán)，溶于水中并稀釋至l000mL。（2）堿性酒石酸銅乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉及75g氫氧化鈉，溶于水中，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至1000mL貯存于橡膠塞玻璃瓶內(nèi)

4、。（3）乙酸鋅溶液：稱取21.9g乙酸鋅，加3mL乙酸，加水溶解并稀釋至l00mL。（4）10.6%亞鐵氰化鉀溶液：稱取l0.6g亞鐵氰化鉀，加水溶解并稀釋至l00mL。（5）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取l.0000g經(jīng)過96±2℃干燥2h的純葡萄糖，加水溶解后加入5mL鹽酸，并以水稀釋至l000mL。此溶液每毫升相當(dāng)于1.0mg葡萄糖。4.實(shí)驗(yàn)步驟（1）樣品處理：稱取約1.00g試樣，置于100mL容量瓶中，加50mL水，混勻，慢慢加入5mL乙酸鋅溶液及5mL亞鐵氰化鉀溶液，加水至刻度，混勻，沉淀，靜置30min，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用。（2）標(biāo)定堿性酒石酸銅

5、溶液：吸取堿性灑石酸銅甲乙液各5.0mL，置于150mL錐形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠3粒。從滴定管滴加約9mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁熱以每2秒l滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)。記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的總體積，平行操作三份，取其平均，按下式計(jì)算。F=c×VF：10mL堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量，mgc：葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mg/mLV：標(biāo)定時(shí)消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，mL（3）試樣溶液預(yù)測：吸取5.0mL堿性灑石酸銅甲液及5.0mL乙液，置于150mL錐形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠3粒，控制在2min內(nèi)加熱至

6、沸，趁沸以先快后慢的速度，從滴定管中滴加試樣溶液，并保持溶液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時(shí)，以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積。當(dāng)樣液中還原糖濃度過高時(shí)應(yīng)適當(dāng)稀釋，再進(jìn)行正式測定，使每次滴定消耗樣液的體積控制在與標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液時(shí)所消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相近，約在10mL左右。當(dāng)濃度過低時(shí)則采取直接加入10mL樣品液，免去加水10mL，再用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)，記錄消耗的體積與標(biāo)定時(shí)消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液體積之差相當(dāng)于10mL樣液中所含還原糖的量。（4）試樣溶液測定：吸取5.0mL堿性灑石酸銅甲液及5.0mL乙液，置于150mL錐形瓶中

7、，加水10mL，加入玻璃珠3粒，從滴定管中加比預(yù)測體積少lmL的試樣溶液至錐形瓶中，使在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸繼續(xù)以每2秒l滴的速度滴定，直至藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積。同法平行操作三份，得出平均消耗體積。5.結(jié)果計(jì)算還原糖（以葡萄糖計(jì)%）=Fm×V100×1000×100式中：m—樣品質(zhì)量，gF—10mL堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量，mgV—測定時(shí)平均消耗樣品的體積，mL100—樣品溶液的總體積，mL6.注意事項(xiàng)（1）本方法測定的是一類具有還原性的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖等