蒽酮法測(cè)還原糖

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1、總糖的含量的測(cè)定（蒽酮法）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆蛰焱壬y(cè)定糖的原理與方法。二、實(shí)驗(yàn)原理蒽酮比色法是一個(gè)快速而簡(jiǎn)便的測(cè)定糖方法。蒽酮可以和游離的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反應(yīng)，反應(yīng)后溶液呈藍(lán)綠色，在620nm處有最大吸收。蒽酮可與其他一些糖類發(fā)生反應(yīng)，但顯現(xiàn)的顏色不同。當(dāng)樣品中存有含有較多色氨酸的蛋白質(zhì)時(shí)，反應(yīng)不穩(wěn)定，呈紅色。對(duì)于以上特定的糖類反應(yīng)較穩(wěn)定。三、實(shí)驗(yàn)器材1.吸管2.試管3.分光光度計(jì)4.水浴鍋5.電爐6.電子分析天平四、實(shí)驗(yàn)試劑1．蒽酮試劑：取2g蒽酮溶于1000ml體積分?jǐn)?shù)為80%的硫酸中，當(dāng)時(shí)配制使用。2．標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：

2、100mg葡萄糖溶于蒸餾水并稀釋至1000ml（可滴加幾滴甲苯作防腐劑）。3．6mol/lHCl溶液。1．10%NaOH溶液：稱取10gNaOH固體，溶于蒸餾水并稀釋至100ml。一、實(shí)驗(yàn)操作1.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線取干凈試管7支，按下表進(jìn)行操作。表蒽酮比色法測(cè)定糖含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線制作管號(hào)步驟0123456標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液/ml00.10.20.30.40.50.6蒸餾水/ml1.00.90.80.70.60.50.4置冷水中5min蒽酮試劑/ml4.04.04.04.04.04.04.0沸水浴中準(zhǔn)確煮沸10min，取出，用自來(lái)水冷卻，室溫放置10min，在620min比色。A62

3、0nm2.樣品的處理（見實(shí)驗(yàn)四）取上述實(shí)驗(yàn)四的水解液，冷卻后用10%NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸餾水定容至100ml，過濾，取濾液10ml，用蒸餾水定容于100ml成稀釋1000倍的總糖水解液，用于糖含量的測(cè)定。測(cè)定時(shí)取1ml總糖水解液測(cè)定還原糖的含量（同標(biāo)準(zhǔn)曲線）。樣品中糖含量的計(jì)算：×100%CVｗ＝ｍw—糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）；C—從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的糖質(zhì)量濃度(mg/ml)；V—樣品稀釋后的體積（ml）；m—樣品的質(zhì)量（mg）。