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《熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展,保障停車場(chǎng)安保新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展,特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果 雙熒光素酶報(bào)告基因分析 1.介紹熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控常被用來(lái)研究培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特性。熒光素酶是理想的報(bào)告基因,因?yàn)椴溉閯?dòng)物細(xì)胞中不含內(nèi)源性熒光素酶,一旦轉(zhuǎn)錄完成立刻就生成功能性的熒光素酶?! ual-Luciferase?雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)中含有在同一細(xì)胞中同時(shí)表達(dá)的兩種熒光素酶。通常,報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)中往往會(huì)受到各種實(shí)驗(yàn)條件的影響,共轉(zhuǎn)
2、染的“對(duì)照”報(bào)告基因會(huì)作為內(nèi)對(duì)照,為試驗(yàn)提供一基準(zhǔn)線。實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因經(jīng)過(guò)內(nèi)參照的處理可以減小細(xì)胞活性和轉(zhuǎn)染效率對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響,因此雙報(bào)告系統(tǒng)減少了外部干擾,使得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更可信。實(shí)驗(yàn)中報(bào)告基因和對(duì)照基因的酶沒(méi)有種源同源性,螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶對(duì)應(yīng)不同的反應(yīng)底物,反應(yīng)中沒(méi)有任何的交叉干擾?! ∥灮鹣x熒光素酶底物和海腎熒光素酶底物分別與檢測(cè)試劑反應(yīng)可以使靈敏度最大化。由于超強(qiáng)的光信號(hào)和超高的信噪比,本系統(tǒng)被廣泛用于制藥和生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)中。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)適配于各種培養(yǎng)哺乳細(xì)胞的培養(yǎng)基,如1
3、640,MEM,DMEM,F(xiàn)12等。這些試劑與被動(dòng)裂解液所附帶的試劑盒,可以從Promega試劑盒中分開(kāi),單獨(dú)使用。目的-通過(guò)該培訓(xùn)員工可對(duì)保安行業(yè)有初步了解,并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力,可提升其的專業(yè)水平,并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展,保障停車場(chǎng)安保新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展,特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果 雙熒光素酶報(bào)告基因分析 1.介紹熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控常被用來(lái)研究培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特性。熒光素酶是理想的報(bào)告
4、基因,因?yàn)椴溉閯?dòng)物細(xì)胞中不含內(nèi)源性熒光素酶,一旦轉(zhuǎn)錄完成立刻就生成功能性的熒光素酶?! ual-Luciferase?雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)中含有在同一細(xì)胞中同時(shí)表達(dá)的兩種熒光素酶。通常,報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)中往往會(huì)受到各種實(shí)驗(yàn)條件的影響,共轉(zhuǎn)染的“對(duì)照”報(bào)告基因會(huì)作為內(nèi)對(duì)照,為試驗(yàn)提供一基準(zhǔn)線。實(shí)驗(yàn)報(bào)告基因經(jīng)過(guò)內(nèi)參照的處理可以減小細(xì)胞活性和轉(zhuǎn)染效率對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響,因此雙報(bào)告系統(tǒng)減少了外部干擾,使得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)更可信。實(shí)驗(yàn)中報(bào)告基因和對(duì)照基因的酶沒(méi)有種源同源性,螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶對(duì)應(yīng)不同的反應(yīng)
5、底物,反應(yīng)中沒(méi)有任何的交叉干擾。 螢火蟲熒光素酶底物和海腎熒光素酶底物分別與檢測(cè)試劑反應(yīng)可以使靈敏度最大化。由于超強(qiáng)的光信號(hào)和超高的信噪比,本系統(tǒng)被廣泛用于制藥和生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)中。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)適配于各種培養(yǎng)哺乳細(xì)胞的培養(yǎng)基,如1640,MEM,DMEM,F(xiàn)12等。這些試劑與被動(dòng)裂解液所附帶的試劑盒,可以從Promega試劑盒中分開(kāi),單獨(dú)使用。目的-通過(guò)該培訓(xùn)員工可對(duì)保安行業(yè)有初步了解,并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力,可提升其的專業(yè)水平,并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)
6、略的發(fā)展,保障停車場(chǎng)安保新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展,特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃 具有超高靈敏度和超寬線性范圍的Veritas?微孔板發(fā)光檢測(cè)儀特別適合DLR報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng),Veritas?軟件中預(yù)裝了DLR的檢測(cè)程序使得安裝更為方便,內(nèi)置自動(dòng)加樣器使得應(yīng)用更為簡(jiǎn)單?! eritas?微孔板發(fā)光檢測(cè)儀使用熒光素酶檢測(cè)試劑II(LARII)最低可以檢測(cè)到1X10-19mol熒光素酶分子,使用Stop&Glo?試劑可以檢測(cè)到1X10-18mol海腎熒光素酶分子,檢測(cè)線性范圍分別
7、為8和6個(gè)數(shù)量級(jí)。所有的檢測(cè)均采用純化的重組螢火蟲熒光素酶(E1701)和純化的重組海腎熒光素酶。 圖1-3使用Promega公司Dual-Luciferase?雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng),螢火蟲熒光素酶(1x10-19到1x10-11mol)和海腎熒光素酶(1x10-14mol)在Modulus?儀上測(cè)量結(jié)果?! ?.所需器材 ?Veritas?微孔板發(fā)光檢測(cè)儀 (P/N9100-002) ?96孔白板(E&KScientificEK-25075) ?Dual-LuciferaseR
8、eporter?熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)(E1980) ?P200移液器和槍頭 3.實(shí)驗(yàn)方案 試劑制備目的-通過(guò)該培訓(xùn)員工可對(duì)保安行業(yè)有初步了解,并感受到安保行業(yè)的發(fā)展的巨大潛力,可提升其的專業(yè)水平,并確保其在這個(gè)行業(yè)的安全感。為了適應(yīng)公司新戰(zhàn)略的發(fā)展,保障停車場(chǎng)安保新項(xiàng)目的正常、順利開(kāi)展,特制定安保從業(yè)人員的業(yè)務(wù)技能及個(gè)人素質(zhì)的培訓(xùn)計(jì)劃 熒光素酶檢測(cè)緩沖液II和熒光素酶檢測(cè)底物:使用所提供產(chǎn)品,-20℃儲(chǔ)存,可以穩(wěn)定保存6個(gè)月,熒光素酶檢測(cè)底物可以4℃保存1個(gè)月。將熒光素酶檢測(cè)緩沖液II加入熒