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1、人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞H446Snail基因表達(dá)及其在順鉑耐藥中的作用況里杉,周向東(400038重慶,第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院呼吸內(nèi)科)[摘要] 目的觀察鋅指轉(zhuǎn)錄因子snail在耐順鉑（cisplatin,CDDP）的人小細(xì)胞肺癌(smallcelllungcancer,SCLC)H446/CDDP細(xì)胞中的表達(dá)情況，探討snail表達(dá)在人SCLC順鉑耐藥中的作用。方法 培養(yǎng)H446細(xì)胞系和H446/CDDP細(xì)胞系，采用MTT法檢測(cè)H446/CDDP的耐藥指數(shù)；分別提取人SCLC順鉑耐藥細(xì)胞H446/CDDP及其親代細(xì)胞H446的mRNA及總蛋白，應(yīng)用sybgree
2、n實(shí)時(shí)熒光RT-PCR、western-blot方法檢測(cè)snailmRNA及蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 H446/CDDP細(xì)胞snail蛋白及mRNA表達(dá)水平較H446細(xì)胞顯著性升高。結(jié)論 SCLC的順鉑耐藥性可能與snail表達(dá)水平增高有關(guān)?！ 關(guān)鍵詞] 人小細(xì)胞肺癌；順鉑耐藥；snail；realtimeRT-PCR；western-blot[中圖法分類號(hào)]R734.2[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]AExpressionofSnailinhumansmall-celllungcancercellH446anditsroleincisplatinresistanceKuang
3、Lisha1,ZhouXiangdong1(1DepartmentofRespiratoryDiseases,southwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,400038,China)[Abstract] Objective weobservedtheexpressionofzincfingertranscriptionfactorSnailinthehumancisplatinresistancesmall-celllungcancer(SCLC)celllineH446/CDDP,s
4、oastostudyitsroleinhumanSCLCcisplatinresistance.Methods H446andH446/CDDPcelllineswereCultured,cisplatinresistanceindexesweremeasuredbymethyltetrazolium(MTT)assay.mRNAandtotalproteinarerespectivelyextractedfromH446andH446/CDDP.ExpressionlevelofsnailinmRNAandproteinlevelwasdetectedb
5、yrealtimeRT-PCRandwestern-blot.Results ThesnailexpressionofH446/CDDPcellsweresignificantlyhigherthanH446cellsbothinproteinandmRNAlevel.ConclusionTheciaplatinresistanceinhumanSCLCmayberelevanttothehighexpressionlevelofsnail.[Keywords] humansmallcelllungcancer;cisplatinresistance;sn
6、ail；realtimeRT-PCR；western-blotSupportedbytheNationalBasicResearchProgramofChina(973Program，2010CB529402)．Correspondingauthor:ZhouXiangdong,E-mail:xiangdongzhou@126.comSCLC易發(fā)生順鉑耐藥，其機(jī)制目前尚不完全清楚，可能與凋亡、DNA修復(fù)異常、細(xì)胞內(nèi)藥物異常積累等多種因素相關(guān)[1]。Snail(鋅指轉(zhuǎn)錄因子)是一種抑制型轉(zhuǎn)錄因子，通過(guò)直接抑制鈣黏蛋白E(E-cadherin)的表達(dá)觸發(fā)上皮-
7、間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelialtomesenchymaltransition,EMT)的發(fā)生，進(jìn)而賦予上皮源性腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和侵襲能力[2,3]。在肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的研究中發(fā)現(xiàn)沉默Snail的表達(dá)能夠恢復(fù)細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性[4,5]，而在SCLC尚缺乏相關(guān)方面的研究。因此，本研究擬從EMT的關(guān)鍵因子snail入手,研究人SCLC順鉑耐藥性的獲得與snail表達(dá)水平之間的關(guān)系,為逆轉(zhuǎn)其耐藥尋求新的途徑。[基金項(xiàng)目] 國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973計(jì)劃，2010CB529402）[通信作者] 周向東,E-mai:xiangdongzhou@126.com
8、1 材料與方法1.1細(xì)胞株及主要試劑人SCLC細(xì)胞系H446（簡(jiǎn)稱
