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《pdgf-b、bmp-7促進(jìn)bmscs向軟骨細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號(hào)R6密級(jí)公開UDC碩士學(xué)位論文PDGF-B、BMP-7促進(jìn)BMSCs向軟骨細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究學(xué)位申請人：劉新宗學(xué)科專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：胡傳義副主任醫(yī)師杜遠(yuǎn)立教授二○一二年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineExperimentofPDGF-B,BMP-7PromoteBMSCstoDifferentiateintoChondrocytesGrad
2、uateStudent:LiuXinzongMajor:Surgery(Orthopaedic)Supervisor:Prof.HuChuanyiProf.DuYuanliChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2012三峽大學(xué)碩士學(xué)位論文三峽大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果，除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。
3、對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體均已在文中以明確方式標(biāo)明，本人完全意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：三峽大學(xué)研究生知識(shí)產(chǎn)權(quán)承諾書本人承認(rèn)：我作為三峽大學(xué)碩士研究生在校學(xué)習(xí)期間，在導(dǎo)師指導(dǎo)下，依據(jù)研究工作所作學(xué)位論文的知識(shí)產(chǎn)權(quán)全部權(quán)歸三峽大學(xué)所有。本人承諾：我有義務(wù)維護(hù)三峽大學(xué)的知識(shí)產(chǎn)權(quán)，凡是以我本人學(xué)位論文內(nèi)的全部或部分研究成果，或?qū)嶒?yàn)數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)所形成的研究論文及成果，無論是以何種形式刊發(fā)學(xué)術(shù)論文、進(jìn)行成果鑒定或申報(bào)獎(jiǎng)勵(lì)，均以三峽大學(xué)為第一作者單位或完成單位，并事先征得
4、導(dǎo)師或?qū)W校相關(guān)部門的同意。我愿承擔(dān)因違背上述承諾而引起的一切法津和經(jīng)濟(jì)后果。學(xué)位論文作者簽名：日期：三峽大學(xué)碩士學(xué)位論文內(nèi)容摘要目的：探討原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外分化為軟骨細(xì)胞的條件。骨髓中提取原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，體外利用BMP-7、PDGF-B誘導(dǎo)具有多分化潛能的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向向軟骨細(xì)胞分化，比較BMP-7、PDGF-B及聯(lián)合時(shí)對其誘導(dǎo)分化的促進(jìn)作用。方法：(1)無菌條件下收集健康、年輕患者因外傷截肢術(shù)后廢棄骨骼中骨髓，4℃冷藏備用。（2）離心管內(nèi)使用配制密度為1.073g/ml的Pe
5、rcoll分離液與稀釋的骨髓分層放置，在1800g條件下低溫離心機(jī)離心30分鐘；吸取白霧細(xì)胞層與D-Hanks液混合并稀釋三倍后1000g條件下低溫離心10分鐘，重復(fù)兩次。(3)離心重懸細(xì)胞并取細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，按比例接種細(xì)胞，用含15%FBS的LG-DMEM培養(yǎng)基在CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)擴(kuò)增原代細(xì)胞，并行細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定及流式檢測細(xì)胞表面抗原。(4)MTT檢測細(xì)胞增殖率，確定細(xì)胞因子使用濃度，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組。(5)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化，進(jìn)行細(xì)胞進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色、Westernblot及RT-PC
6、R檢測Ⅱ型膠原蛋白含量及mRNA表達(dá)量，并予以統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：(1)成功獲得原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增；(2)行光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定及流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面抗原，符合間充質(zhì)干細(xì)胞的特點(diǎn)；(3)不同濃度下MTT檢測間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖效率，以BMP-7200ng/ml及PDGF-B75ng/ml濃度時(shí)細(xì)胞增殖活躍程度最明顯；(4)在BMP-7、PDGF-B的參與下，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞定向分化；PDGF-B對分化過程的促進(jìn)作用大于BMP-7對誘導(dǎo)過程的作用；PDGF-B與BMP-7聯(lián)合
7、組對成軟骨細(xì)胞分化過程的促進(jìn)作用大于單用其中一種因子，可提高低劑量TGF-β的誘導(dǎo)效率。結(jié)論：成功提取BMSCs，進(jìn)行成軟骨誘導(dǎo)分化。PDGF-B與BMP-7在含低劑量TGF-β培養(yǎng)基誘導(dǎo)成軟骨細(xì)胞的過程中具有促進(jìn)誘導(dǎo)分化的作用；二者聯(lián)合使用后誘導(dǎo)效率明顯高于單用組，高于單用TGF-β組，為體外誘導(dǎo)分化軟骨細(xì)胞提供了新的思路。關(guān)鍵詞：血小板衍生生長因子-B骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化三峽大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractObjectiveToinvestigatethefeas
8、ibilityofinducingmarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)differentiatedintochondrocytesinvitro.ExtractedoriginalgenerationBMSCsfrombonemarrowstromal,BMP-7,PDGF-BcaninductmultipotentBMSCsdifferentiateintochondrocytelineageinvitro,Comparingthedifferent
