資源描述：
《pdgf與vegf聯(lián)合誘導(dǎo)人bmscs向軟骨細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號R6密級公開UDC684.3碩士學(xué)位論文PDGF與VEGF聯(lián)合誘導(dǎo)人BMSCs向軟骨細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究學(xué)位申請人：謝輝晉學(xué)科專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：杜遠(yuǎn)立教授二○一二年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineEffectsofPDGFandVEGFininducingchondrogenesisofbonemarrowstemcells:anin-vitroresearchGraduateStud
2、ent:XieHuijinMajor:SurgerySupervisor:Prof.DuYuanliChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2012三峽大學(xué)碩士學(xué)位論文三峽大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果，除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體均已在文中以明確方式標(biāo)明，本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者
3、簽名：日期：三峽大學(xué)研究生知識產(chǎn)權(quán)承諾書本人承認(rèn)：我作為三峽大學(xué)碩士研究生在校學(xué)習(xí)期間，在導(dǎo)師指導(dǎo)下，依據(jù)研究工作所作學(xué)位論文的知識產(chǎn)權(quán)全部權(quán)歸三峽大學(xué)所有。本人承諾：我有義務(wù)維護(hù)三峽大學(xué)的知識產(chǎn)權(quán)，凡是以我本人學(xué)位論文內(nèi)的全部或部分研究成果，或?qū)嶒?yàn)數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)所形成的研究論文及成果，無論是以何種形式刊發(fā)學(xué)術(shù)論文、進(jìn)行成果鑒定或申報獎勵，均以三峽大學(xué)為第一作者單位或完成單位，并事先征得導(dǎo)師或?qū)W校相關(guān)部門的同意。我愿承擔(dān)因違背上述承諾而引起的一切法津和經(jīng)濟(jì)后果。學(xué)位論文作者簽名：日期：I三峽大學(xué)碩士學(xué)位論文內(nèi)容摘要目的：本實(shí)驗(yàn)旨在建立體外分離、
4、培養(yǎng)BMSCs的方法，擬驗(yàn)證在血管內(nèi)皮生長因子與血小板衍生生長因子聯(lián)合作用下，BMSCs向軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化是否優(yōu)于單獨(dú)使用細(xì)胞因子。為軟骨組織工程提供更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為人工軟骨的臨床運(yùn)用打下堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。方法：采用密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法分離人體股骨干骨髓中的BMSCs，經(jīng)體外擴(kuò)增培養(yǎng)、流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表面抗原后，取第4代細(xì)胞在單層培養(yǎng)條件下，按空白組、PDGF組、VEGF組，PDGF+VEGF組，采用MTT法測各組BMSCs增殖情況，再進(jìn)行向軟骨方向的誘導(dǎo)培養(yǎng)。在誘導(dǎo)的第28天采用阿利新藍(lán)—HE染色法觀察各組細(xì)胞形態(tài)，用阿利新藍(lán)比色法
5、測GAG含量，用RT-PCR法檢測Ⅱ型膠原mRNA量，用westernblot法測Ⅱ型膠原表達(dá)水平。結(jié)果：采用密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法分離出的細(xì)胞符合BMSCs形態(tài)特征，流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果為：CD34、CD45為陰性，CD44、CD90、CD29為陽性，符合BMSCs表面抗原表達(dá)特性。MTT法檢測結(jié)果示：在24h、48h、72h三個時間段，PDGF組、VEGF組、PDGF+VEGF組的OD值均明顯高于空白組，且P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；PDGF組、VEGF組的OD值均明顯高于VEGF+PDGF組，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。誘
6、導(dǎo)至28天時采用阿利新藍(lán)——HE復(fù)染色，各組均可見均勻藍(lán)染的細(xì)胞外基質(zhì)，基質(zhì)中可見明顯的軟骨陷窩，陷窩內(nèi)可觀察到類軟骨結(jié)構(gòu)，空白組的細(xì)胞外基質(zhì)相對其他組藍(lán)染較淡，軟骨陷窩數(shù)量較其他組少。PDGF+VEGF組的細(xì)胞外基質(zhì)相對其他組藍(lán)染最深，軟骨陷窩數(shù)量高于其他各組，且胞核清晰、觸角明顯。PDGF組與VEGF組爬片相比較，未見明顯差異。阿爾新藍(lán)法測定培養(yǎng)液中GAG的含量結(jié)果為：空白組：55.40±2.31mg/L，PDGF組：65.81±1.56mg/L，VEGF組：67.66±1.49mg/L，VEGF+PDG組：89.33±0.83mg/L
7、，PDGF組、VEGF組、PDGF+VEGF組的GAG含量均高于空白組，且P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。VEGF+PDGF組的值要高于PDGF組、VEGF組，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RT-PCR法檢測Ⅱ型膠原mRNA水平顯示：PDGF組、VEGF組、PDGF+VEGF組的半定量值均高于空白組，且P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。VEGF+PDGF組的值要高于PDGF組、VEGF組，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Westernblot法檢測Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)水平顯示：PDGF組、VEGF組、PDGF+VEGF組的半定量值均高于空白組，
8、且P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。VEGF+PDGF組的值要高于PDGF組、VEGF組，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法分離出的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
