蟾毒靈對(duì)人食管癌細(xì)胞te13增殖抑制的機(jī)制研究

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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文蟾毒靈對(duì)人食管癌細(xì)胞TE13增殖抑制的機(jī)制研究姓名：郭曉娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：王小玲；劉月平201203中文摘要蟾毒靈對(duì)人食管癌細(xì)胞TEl3增殖抑制的機(jī)制研究摘要食管癌是世界上最常見(jiàn)的六大惡性腫瘤之一，具有顯著的地域性分布差異。其中我國(guó)食管癌的發(fā)病率和死亡率最高。盡管目前食管癌的診療技術(shù)不斷提高，仍阻擋不了其發(fā)病率的逐年上升。因此，進(jìn)一步研究臨床抗腫瘤藥物對(duì)食管癌的影響及有關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的活化，依然是食管癌治療研究的目標(biāo)。c-Jun氨基末端激酶(c．JunN．terminalkinase，YNK)是絲裂素活化蛋白激

2、酶(Mitogenactivatedproteinkinases，MAPK)超家族成員之一，又稱應(yīng)激激活蛋白激(stressactivatedproteinkinase。SAPKs)。在多種細(xì)胞應(yīng)激(如電離輻射、滲透壓、熱休克和氧化損傷等)下，可以發(fā)生有效磷酸化而激活，轉(zhuǎn)到信號(hào)至細(xì)胞核，發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)(如引起細(xì)胞增殖、分化、凋亡等)。目前有研究發(fā)現(xiàn)，抑制腫<活化能夠抑制腫瘤細(xì)胞的惡性增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。蟾毒靈(Bufalin)是從蟾蜍科動(dòng)物中華大蟾蜍和黑眶蟾蜍的皮膚和耳后腺中提取和分離的有效抗癌成分。以往的研究證明，蟾毒靈在體外對(duì)人白血病、肝癌、胃癌以及胰腺癌細(xì)胞增殖均

3、有一定的抑制作用，但其抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用的機(jī)制尚不十分清楚。目前有關(guān)蟾毒靈對(duì)食管癌的影響的研究甚少。本課題采用蟾毒靈作用于食管癌細(xì)胞TEl3，檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖的抑制和JNK蛋白表達(dá)及活(P．卟Ⅸ)水平的影響，旨在探討蟾毒靈對(duì)食管癌細(xì)胞的影響以及可能的分子機(jī)制，為臨床化學(xué)治療提供理論依據(jù)。目的：通過(guò)蟾毒靈作用于人食管癌細(xì)胞株TEl3，觀察蟾蜍靈對(duì)TEl3細(xì)胞增殖抑制的作用，研究蟾蜍靈對(duì)人食管癌細(xì)胞株TEl3中JNK和P．JNK蛋白表達(dá)的影響，分析其抑制增殖的可能機(jī)制，為食管癌的發(fā)生機(jī)制及治療新靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。方法：使用不同濃度的Bufalin(O、10、25、50、1

4、00nmol／1)處理人食管癌TEl3細(xì)胞，采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)各組細(xì)胞經(jīng)不同濃度的Bufalin處理后的濃度變化。采用MTT法檢測(cè)Bufalin對(duì)TEl3細(xì)胞的增殖抑制作中文摘要用，并繪制細(xì)胞增殖抑制曲線。采用Westernblot技術(shù)檢測(cè)JNK和P．JNK蛋白在各組細(xì)胞中的表達(dá)情況。采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)JNK和P．JNK蛋白在各組細(xì)胞中的定位及表達(dá)。最后采用SPSS13．0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P<0．05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著差異。結(jié)果：1．細(xì)胞計(jì)數(shù)方法檢測(cè)結(jié)果顯示：Bufalin對(duì)人食管癌TEl3細(xì)胞株的增殖有明顯的抑制作用。經(jīng)不同濃度的Bufalin處理細(xì)胞

5、24h后，其各組的細(xì)胞濃度：(4．35士0．10)x105、(4．08+0．06)×105、(3．7士0．09)×105、(2．7士0．07)x105、(2．3510．09)x105個(gè)細(xì)胞／ml，隨藥物濃度的增加而降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．01)。Bufalin可以抑制人食管癌TEl3細(xì)胞的增殖，且呈劑量依賴方式。2．MTT檢測(cè)結(jié)果顯示：Bufalin對(duì)人食管癌TEl3細(xì)胞株有明顯的增殖抑制作用。不同濃度的Bufalin分別作用食管癌TEl3細(xì)胞24h、48h及72h，其吸光值(24h：1．004士0．025、0．869士0．012、0．735士0．013、0．5

6、62士0．025、0．462+0．021：48h：1．004+0．014、0．760士0．020、0．645士0．010、0．475+0．021、0．356士0．027；72h：1．001士0．011、0．668士0．024、0．538士0．021、0．413士0．032、0．237士0．037)在同一時(shí)間下隨著濃度的增加而逐漸減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

7、g結(jié)果顯示：經(jīng)不同濃度Bufalin處理過(guò)的食管癌TEl3細(xì)胞株，JNK表達(dá)水平無(wú)明顯變化，各組細(xì)胞JNK平均相對(duì)表達(dá)量分別為(0．786士0．005；0．776土0．005；0．779-2：0．016；0．792士0．015；0．769士0．014)，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>O．05)；而P．JNK的表達(dá)水平明顯降低，各組細(xì)胞P．JNK平均相對(duì)表達(dá)量分別為(0．740士0．007；0．687士0．006；0．662士0．005；0．587土o．007；0．394士0．012)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．01)。且各組細(xì)胞P．JNK的表