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《蟾毒靈抑制血管生成作用的初步觀察論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、蟾毒靈抑制血管生成作用的初步觀察論文.freelL。雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn)表明蟾毒靈可顯著抑制血管生成的作用,并呈濃度依賴性。結(jié)論蟾毒靈具有明確的抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、抗血管生成的作用?！娟P(guān)鍵詞】蟾毒靈;抗血管生成;血管內(nèi)皮細(xì)胞;雞胚絨毛尿囊膜Abstract：ObjectiveToobservetheanti-angiogenesisactivityofbufalinandfindthebestreasonableconcentrationforfurtherclinicaluse.MethodTheinhibitoryeffectofbufalinonECV304c
2、ellsindifferenttimesandconcentrationsethod,itsconcentration-effectandtime-effectrelationshipethodofchorioallantoicmembrane(CAM).ResultBufalinhadinhibitiongroedependence.TheIC50of24,48,.freelLrespectively.IntestofCAM,differentconcentrationsofbufalincouldinhibittheangiogenesisofCAM(P0.01
3、)embrane血管生成是惡性腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中必不可少的環(huán)節(jié),而抗血管生成作為一種新的抗腫瘤治療手段日益受到重視。蟾蜍是我國傳統(tǒng)的中藥材,很早就有蟾蜍全蟲或蟾酥內(nèi)服及外用治療癥瘕積聚、痰注、惡瘡等類似腫瘤疾病的記載。蟾毒靈(Bufalin,二羥蟾毒二烯酸內(nèi)脂)是從中藥蟾酥中提取的一種毒性配基之一,現(xiàn)代研究顯示,蟾毒靈在體外對人白血病、胃癌及肝癌細(xì)胞生長均有一定的抑制作用1-4,我們的前期研究也發(fā)現(xiàn)蟾毒靈是蟾蜍中體外抗肝癌藥理活性最強(qiáng)的單體之一5。但有關(guān)蟾毒靈抗血管生成作用的研究卻鮮有報(bào)道,本研究觀察其對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV304生長的影響,并觀察了蟾毒靈
4、對雞胚絨毛尿囊膜(CAM)新生血管形成的影響?，F(xiàn)報(bào)道如下。1實(shí)驗(yàn)材料DMEM培養(yǎng)基、10%胎牛血清、1∶250胰蛋白酶等為美國Gibco公司產(chǎn)品,HEPES緩沖液為德國Merck公司產(chǎn)品,四甲基偶氮唑鹽(MTT)、蟾毒靈為Sigma公司產(chǎn)品。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304細(xì)胞購自中國科學(xué)院海細(xì)胞生物研究所,白皮受精雞蛋購自上海太平洋家禽有限公司。MIQAS醫(yī)學(xué)圖像定量分析軟件由上海申騰信息技術(shù)有限公司提供。2實(shí)驗(yàn)方法2.1人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV304的培養(yǎng)細(xì)胞解凍后于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液,37℃、5%CO2、飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),取指數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)
5、。2.2對體外培養(yǎng)ECV304細(xì)胞生長活性的影響ECV304細(xì)胞以5×104/孔接種,10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液,37℃、5%CO2培養(yǎng)至融合狀態(tài),換成無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)24h后,加入不同濃度蟾毒靈(分別為3.8×10-5、3.8×10-4、3.8×10-3、3.8×10-2、0.38、3.8?g/mL);陰性組為不加藥物處理的細(xì)胞懸液;空白組為無細(xì)胞及藥物的培養(yǎng)液。作用24、48、72h3個(gè)時(shí)間點(diǎn)采用MTT法檢測細(xì)胞生長抑制率。抑制率(IR%)=(對照組OD值-實(shí)驗(yàn)組OD值)/對照組OD值×100%。并采用加權(quán)直線線性回歸法求得細(xì)胞生長抑制率為50%時(shí)的藥物濃度
6、。2.3對雞胚尿囊膜血管生成的抑制作用種蛋置于37℃培養(yǎng)箱中孵化第7日,消毒,開窗,制備假氣室。放置無菌明膠海綿小塊(4mm×4mm×4mm),分別滴加不同濃度的蟾毒靈(3.8×10-3、3.8×10-2、0.38?g/mL);對照組加同體積生理鹽水。封閉窗口孵育72h后固定,剪下約3cm×3cm的尿囊膜拍攝并進(jìn)行圖像定量分析。3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理。選擇方差分析進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),多組均數(shù)間兩兩比較采用Student-Nean-Keuls法。P0.05提示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4結(jié)果4.1不同濃度蟾毒靈對ECV304細(xì)胞增殖的影響不同濃度的
7、蟾毒靈對ECV304細(xì)胞生長均有不同程度抑制作用(P0.05),實(shí)驗(yàn)中最低濃度(3.8×10-5?g/mL)抑制率即可達(dá)16.4%,且抑制作用隨藥物濃度遞增而提高,同一時(shí)間各濃度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示其作用具有濃度依賴性。4.2藥物作用時(shí)間對ECV304細(xì)胞增殖的影響隨著作用時(shí)間的延長,蟾毒靈抑制效果增強(qiáng),作用呈現(xiàn)時(shí)間依賴性,同濃度不同時(shí)間差異顯著。72h時(shí)低濃度(3.8×10-5?g/mL)抑制率即可達(dá)23.45%,而高濃度時(shí)(3.8?g/mL)抑制率達(dá)81.87%,顯示出較強(qiáng)的抑制作用。24、48、72h的IC50分別為1.104、0.355
