流蘇石斛再生體系與農(nóng)桿菌介導遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)建立的研究

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1、卻愛韻＇．．ｒ懼、．＇。＇Ｖ－蓋—ＩＩ巧古學化．４．■．：＇．．Ｕ，．一占．，’？＇．，Ｊ流蘇石解再生體系與農(nóng)桿菌介導遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)建立的研究＇Ｗ．Ｖ．■．ｒ黃超群？．．■■？．－：．１Ｉ．，Ｌ化一磕偷如ｒ一０五年五月—ｌｉｌｉｌｔｅ＇，分類號Ｓ７２２．３密級公開ＵＤＣ編號碩古學位論文流蘇石解再生體系與農(nóng)桿菌介導遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)建立的研究黃超群學科專業(yè)生態(tài)

2、學指導教師奠昭展教授秦武明教授論文答辯日期２０１５年５月２２日學位授予日期２０１５年６月答辯委員會主席溫遠光教授廣西大學學位論文原創(chuàng)性和使用授枚聲明本人聲明所呈交的論文，是本人在導師的指導下獨立進行研究所取得的研究成果。除已持別加標注和致謝的地方外，論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含本人或他人為獲得廣西大學或其它單位的學位而使用過的材料一。與我同工作的同事對本論文的研究王作所做的貢獻均已在論文中作了明確說明。本人在導師指導下所完成的學位論文及相關的職務作品，知識產(chǎn)權歸

3、屬廣西大學。本人授權廣西大學擁有學位論文的部分使用權，即；學校有權保存并向國家有關部口或機構送交學位論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可Ｗ將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索和傳播，可Ｗ采用影印、縮印或其它復制手段保存、匯編學位論文。本學位論文屬于；□保密，在年解密后適用授權。材不保密。＂＂請在Ｗ上相應方框內(nèi)打Ｖ（）論文作者簽名．ｐ；為賓群曰期；如ｊｒ／ｙ占．指導教師簽名：曰期；妙ｒ．、作者聯(lián)系電話；；電子郵箱流蘇石斜再生體系與農(nóng)桿菌介導遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)建立的硏究摘要

4、一流蘇石解ＣＯｅｗｄｒａＷｗｎ仇ａｆＷＭ．Ｈｏｏｋ是我國藥用植物中很重要的）個品種，具有很好的藥用價值，主要有滋陰清熱、生津止渴等功效，主要分布于廣西、貴州、云南等地，生長于溫暖濕潤和半陰半陽的氣候環(huán)境。由于野生資源被過度采挖利用，加上其本身對生存環(huán)境的較高要求且產(chǎn)生的種子自然的繁殖率低化及生長緩慢的問題，已鑛臨滅絕。因此，選育新品種、建立快繁體系Ｗ及利用基因工程進行改良成為當前流蘇石解研究的重點。本文流蘇石解種子為材料，建立流蘇石解再生體系和農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化體系，為今后流蘇石解基因王程育種提供重要的

5、參考依據(jù)。主要試驗的結(jié)論如下：１．Ｗ流蘇石解種子為起始外植體，研究了基本培養(yǎng)基、植物生長調(diào)節(jié)劑、附加物等因素對流蘇石解原球莖的誘導、增殖培養(yǎng)及原球莖芽分化和壯苗生根的影響＋６－ＢＡ。結(jié)果表明；（１）種子誘導原球莖最佳培養(yǎng)基為：ＭＳ１＋Ｎ＋－．ＯｍｇＡＭ０．２ｍｇ／ａ２４Ｄ１．ＯｍＬ牛３０Ｌ＋４．Ｏ，ｇ／薦糖ｇ／瓊脂ｇ／Ｌ，經(jīng)培養(yǎng)４０ｄ原球莖誘９０％ｙＭＳ＋６－；ｌ上（２）ＢＡ１５導率可達．；最佳增殖培養(yǎng)基配方為：ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．８ｍｇ／Ｌ＋證Ａ０．４ｍｇ／Ｌ＋歳糖３０ｇ／Ｌ＋王豆汁巧

6、％＋活性炭０．５ｇ／Ｌ＋－瓊脂４．０１０３２ＭＳ＋６ＢＡｇ／Ｌ，増殖系數(shù)可達Ｗ上；（）最佳分化培養(yǎng)基為：１／０．２ｍｇ／Ｌ＋ＮＭ１．０ｍｇ／Ｌ＋糜搪３０ｇ／Ｌ＋±豆汁１５％＋瓊脂４．０ｇ／Ｌ，分化率４＋＋可達９０％；（）最佳壯苗生根培養(yǎng)基配方為：腑０．１ｍｇ／ＬＫＴ０．５ｍｇ／ＬＩＭ＋＋＋＋薦糖３０ｇ／Ｌ±豆汁巧％活性炭０．日瓊脂４．０／Ｌ１００％。ｇ／Ｌｇ，生根率可達２．流蘇石解原球莖作為受體材料，通過篩選卡那霉素和教予青霉素Ｉ的工作濃度后，利用正交試驗

7、設計對農(nóng)桿菌介導流蘇石斜遺傳轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)化條件進行優(yōu)化１）２００ｍ。結(jié)果表明：（卡那霉素濃度為ｇ／Ｌ能夠有效抑制非轉(zhuǎn)化材料的生長，可作為抗性植株初步篩選的濃度；（２）幾節(jié)青霉素濃度為２００ｍｇ／Ｌ能夠完全抑制農(nóng)桿菌的生長，可作為遺傳轉(zhuǎn)化脫菌時的最佳濃度；（３）農(nóng)桿菌介導遺傳轉(zhuǎn)化的最佳條件；浸染時間２０ｍｉｎ、０〇６。。值為０．８、共培養(yǎng)時間日ｄ、添加己醜Ｔ香麗ＡＳ５０ｕｍｏｌ／Ｌ時，獲得的轉(zhuǎn)化率最高。試驗對已經(jīng)篩選了２個月的抗性原球莖進行ＰＣＲ鑒定，表明已得到了轉(zhuǎn)化陽性的原球莖，初步證實目的基因已整合到流蘇

8、石解的基因組中。關鍵詞：流蘇石解再生體系農(nóng)桿菌介導遺傳轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)基因植株ｎｍ－ＳｔｕｄｉｅｓｏｎＲｅｅｎｅｒａｔｉｏｎＳｓ化ａｎｄＡｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｅｄ