免疫標(biāo)記技術(shù)及其在食品安全檢測中的應(yīng)用

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1、新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)專業(yè)文獻綜述題目:免疫標(biāo)記技術(shù)及其在食品安全檢測中的應(yīng)用姓名:陳澤學(xué)院:食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院專業(yè):食品質(zhì)量與安全班級:食品質(zhì)量與安全112班學(xué)號:114033207指導(dǎo)教師:王子榮職稱:教授2014年6月10日新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)教務(wù)處制免疫標(biāo)記技術(shù)及其在食品安全檢測中的應(yīng)用作者：陳澤指導(dǎo)老師：王子榮摘要：文章介紹了免疫標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展以及免疫標(biāo)記技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用，包括免疫熒光技術(shù)、免疫酶技術(shù)、放射免疫測定法、免疫膠體金技術(shù)和發(fā)光免疫測定法，并概述這些檢測技術(shù)對食品安全的重要作用及影響。關(guān)鍵詞：免疫標(biāo)記技術(shù)；食品安全；檢測免疫分析法是以抗原抗體特異性結(jié)合生成抗原抗體免疫復(fù)合物

2、為基礎(chǔ)，用來檢測生物樣品中較低含量活性物質(zhì)的檢測方法。此種分析方法的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)的高度專一性和反應(yīng)靈敏性。進行免疫分析的前提是獲得與檢測物質(zhì)相對應(yīng)的抗體或抗原，抗體的特異性和親和性都是決定免疫分析能力的重要影響因素。免疫標(biāo)記技術(shù):泛指使用熒光素、放射性同位素、酶、膠體金以及化學(xué)(或生物)發(fā)光劑等作為標(biāo)記物，標(biāo)記的抗體或抗原和與之對應(yīng)的抗原或抗體進行特異性的抗原抗體反應(yīng)，最終借助各種精密的檢測儀器對實驗結(jié)果進行觀察和測定。免疫標(biāo)記技術(shù)可以為樣本定性研究，或為樣本定量或者半定量檢測技術(shù)，也可以在細胞或者組織中進行定位研究。一、免疫分析發(fā)展的歷史20世紀(jì)50年代，免疫分析方法最初應(yīng)用在

3、體液中生物大分子的檢測。1959年，美國學(xué)者Yalow和Bersou建立檢測糖尿病患者血漿中胰島素的免疫標(biāo)記方法，巧妙地將放射性同位素125I示蹤技術(shù)和傳統(tǒng)的免疫方法相結(jié)合，使免疫分析技術(shù)從定性技術(shù)轉(zhuǎn)變?yōu)槎考夹g(shù)，開創(chuàng)免疫標(biāo)記的先河。1971年，瑞典學(xué)者Eugvai和Perlmauu用酶代替放射性同位素進行標(biāo)記，創(chuàng)建了酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。1982年，Neurmau在免疫分析的基礎(chǔ)上發(fā)展了一種新型免疫分析技術(shù)——時間分辨熒光免疫測定(TRFLA)。1976年，Tsuji等基于酶與其特異性發(fā)光物質(zhì)與免疫反應(yīng)相結(jié)合，建立化學(xué)發(fā)光免疫測定(CLIA)。1990年，Leland建立電

4、化學(xué)發(fā)光(ECLIA)，是繼放射免疫、酶免疫、熒光免疫,ELIA以后的新一代標(biāo)記免疫測定技術(shù)。二、免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)又稱熒光抗體法(fluorescentantibodytechnique,FAT)，是一種將結(jié)合有熒光素(異硫氰酸熒光素、羅丹明、二氯二嗓基氨基熒光素)的熒光抗體作為分子探針與抗原進行反應(yīng)，借以提高免疫反應(yīng)靈敏度和適合顯微鏡觀察的免疫標(biāo)記技術(shù)。該法具有靈敏度高、特異性強的特點。免疫熒光技術(shù)的原理是將抗原抗體反應(yīng)的特異性和敏感性與顯微小蹤的精確性相結(jié)合，以有熒光素作為標(biāo)記物，與已知抗體結(jié)合，但不影響其免疫學(xué)特性。然后將熒光素標(biāo)記的抗體作為標(biāo)準(zhǔn)試劑，用以檢測和鑒定未知抗

5、原。在熒光顯微鏡下，可以直接觀察呈現(xiàn)特異熒光的抗原抗體復(fù)合物以及其存在部位。張冬青等采用膜溶解、密度梯度分離純化結(jié)合免疫熒光技術(shù)對飲用水中的“兩蟲”(隱抱子蟲和賈第鞭毛蟲)進行定性定量分析檢測，其回收率分別為56%和35%，均高于EPA1623方法的質(zhì)量控制要求。采用免疫熒光技術(shù)操作方法簡便且經(jīng)濟，適合在國內(nèi)水源檢測中推廣使用。有報道首次將微菌落技術(shù)同免疫熒光技術(shù)相結(jié)合，建立了微菌落免疫熒光技術(shù)(M-CIF)。M-CIF法敏感性和重復(fù)性好，用已知沙門氏菌濃度做最低檢出限量實驗，常規(guī)法檢出限為10個/mL，而該法為5個/mL;陽性對照和陰性對照重復(fù)10次，陽性菌落均熒光明亮，顏色穩(wěn)定，陰

6、性菌落均熒光很弱。用M-CIF法對不同菌落進行特異性的熒光染色鑒別細菌，僅需5-6h，在食品有害微生物檢測方面有著非常大的應(yīng)用前景。三、免疫酶技術(shù)免疫酶技術(shù)又稱酶免疫測定法，是將抗原和抗體的特異免疫反應(yīng)和酶催化反應(yīng)的高效性和專一性相結(jié)合而建立的一種新技術(shù)，常用的酶是辣根過氧化物酶。其原理和免疫熒光技術(shù)相似，不同的是用酶代替熒光劑做標(biāo)記，以及酶的特殊底物處理標(biāo)本來顯示酶標(biāo)記的抗體，以檢測標(biāo)記物的有無及含量間接反映被測物的存在與多少。該技術(shù)具有操作簡單、敏感性高、準(zhǔn)確性好、易于商品化等特點，正被廣泛應(yīng)用于微量物質(zhì)檢測、免疫相關(guān)物質(zhì)檢測等各個領(lǐng)域的分析檢測。免疫酶技術(shù)方法很多，最主要的方法為

7、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，簡稱酶標(biāo)法，被廣泛用于檢測抗原或抗體，可進行定性和定量分析。ELISA法可檢測食品中的病原菌沙門氏菌、大腸桿菌等，食品中的微量農(nóng)藥殘留，以及醬油生產(chǎn)中能引起中毒的霉菌次級代謝產(chǎn)物黃曲霉毒素、超曲霉毒素等方面。用該法進行李斯特氏菌的快速檢測，用三株針對單核細胞增生僅需48h，在人工模擬肉中檢測下限為5cfu/g樣品。陳琦等采用酶聯(lián)免疫試劑盒及繪制以氯霉素濃度為半對數(shù)坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線對牛肉和蜂蜜中氯霉素殘留量進行測定，變