環(huán)磷酰胺對不同發(fā)育時期睪丸生精細胞毒性損傷的動物實驗研究

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1、重慶醫(yī)科大學碩士學位論文環(huán)磷酰胺對不同發(fā)育時期睪丸生精細胞毒性損傷的動物實驗研究姓名：岳麗琴申請學位級別：碩士專業(yè)：兒科學（泌尿外科）指導教師：李旭良2003.5.1重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文英文縮寫一覽表英文縮寫英文全稱CTXCyclopbosphamideBcl—-2B--celllymphoma-2PIPropidiumIodideTUNELTerminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabelingFCMPODDNaseODDNAPBSSABCHETGn

2、RHECMSETBSFlowcytometryPeroxidaseDeoxyribonucleaseOpticaldensityDeoxyribonucleicacidPhosphateBufferedSalineStrept-Avidin—BiotincomplexHemotoxylinandEosinStairmingTestostemneGonadotropin-releasinghormoneEstrogenCountmeasurespermatogenicepitheliumTubularbiopsyscored中文全

3、稱環(huán)磷酰胺B細胞淋巴瘤．2碘化丙啶脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的dUTP缺口末端標記法流式細胞儀過氧化物酶DNA酶光密度脫氧核糖核酸磷酸鹽緩沖的生理鹽水鏈霉親和素．生物素一酶復合物蘇木素．伊紅染色睪酮促性腺激素釋放激素雌激素生精上皮細胞計數睪丸活檢評分蕈慶醫(yī)科人學碩L研究生學位論文環(huán)磷酰胺對不同發(fā)育時期睪丸生精細胞毒性損傷的動物實驗研究摘要目的通過CTX對不同發(fā)育時期睪丸生精細胞毒性損傷程度的研究，探討是否年齡越小抗腫瘤藥物對生精細胞的損害越輕，從而為性腺保護劑的運用尋找理論依據。I方法取1周，3周，5周，9周雄性Wistar大

4、鼠，分別對應大鼠L睪丸生精細胞發(fā)育的不同階段，即精子發(fā)生前階段，早期精子發(fā)生時期，精子發(fā)生時期和性成熟階段，每年齡組24只，按配對的方法分為12對，再隨機分為用藥早期組(用藥后24小時處死)和用藥后期組(用藥后9周處死)各6對，每對再隨機分到實驗組和對照組。早期組于用藥24小時后處死動物取睪丸標本，用TUNEL法檢測生精細胞的凋亡率，免疫組化檢測凋亡相關基因Bcl一2的表達情況；流式細胞儀檢測生殖細胞周期。后期組于用藥9周后處死動物取睪丸組織標本，光鏡觀察曲細精管的病理改變，并計算曲細精管平均直徑，面積、生精上皮細胞計數(CMS

5、E)、Johnsen’S評分。結果1CTX對不同發(fā)育時期睪丸的急性期損傷：1．1生精細胞凋亡的檢測：蕈慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文1周，3周，5周，9周的正常對照組存在一個自然凋亡過程，其中以3周時期最高，而1周時幾乎未見凋亡發(fā)生，用CTX干預后，除1周外，各年齡組與相應對照組比較均有顯著差異(P<0．01)，其中實驗組和對照組中均以3周和5周的凋亡率最高，但二者之間無顯著差異(P>0．05)。1．2BCL一2蛋白的表達：各對照組及實驗組與上述生精細胞的凋亡改變成正相關。除l周組外，各年齡組中實驗組均比相應對照組顯著下降(P<0

6、．叭)，且正常對照組及實驗組中在3周時的表達率均為最高。1．3流式細胞儀檢測生精細胞s期所占的比例：除1周組外，各年齡組中實驗組均比相應對照組顯著下降(P<0．01)，其中，以3周齡和5周齡組的S期下降最顯著，但在對照組和實驗組中，S期所占的比例3周和5周之間均無顯著差異(P>O．05)。2CTX對不同發(fā)育階段睪丸毒性損傷的遠期結果：成年期大鼠除1周年齡組外，各年齡組中實驗組的曲細精管面積、直徑、生精上皮細胞計數、Johnsen’s評分均顯著低于相對應對照組(P<0．01)，并且隨著年齡的增大，損害有增加的趨勢，配對比較方差分析

7、發(fā)現3周，5周，9周之間有顯著性差異(P

8、生精細胞凋亡與抑制凋亡的基因BCL．2的表達下調有關。(4)CTX可顯著抑制精原細胞和細線前期的精母細胞的增殖，以生精發(fā)育活躍時更明顯。(5)通過對CTX所致睪丸遠期毒性損傷的組織學檢測，表明年齡越小所受的損害越?。黄渲形窗l(fā)育睪丸對CTX的毒性損傷耐受性最強，證