超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定原料乳和奶粉中三聚氰胺的含量

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1、礴河南畜牧獸醫(yī)綜合版2009年(第30卷)第4期超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法測定原料乳和奶粉中三聚氰胺的含量方忠意，劉素梅，宋志超，譚旭信，陳薔，杜紅鴿，朱紅繼(河南省畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測檢驗中心，河南鄭州450008)摘要：該試驗建立了使用超高效液相色譜一串聯(lián)四極桿質(zhì)譜測定原料乳和奶粉中三聚氰胺含量的檢測方法用三氯乙酸溶液和乙酸鉛提取．提取液經(jīng)MCX固相萃取柱凈化后用UPLC—MS—MS進行檢測。色譜條件：CAPCELLPAKCR1：4柱(2．0mmX100mmi．d．，5m)，流動相：乙腈一0．01mol／L乙酸銨溶液，梯度洗脫流速O．3m

2、l／min采用正離子模式的電噴霧質(zhì)譜檢測．以一級質(zhì)譜得到的準分子離子m／z126．8作為母離子，進行碰撞誘導解離(CID)二級質(zhì)譜(MS2)分析，選擇母離子和MS2的碎片離子m／z84．9、67．8定性確證，提取m／z84．9離子質(zhì)量色譜峰面積定量?；|(zhì)標準線性范圍為O．01~1．00~g／rnl，檢出限10Ixg／kg(S／N=10)，原料乳回收率為82．4％~97．8％．奶粉回收率為80．7％~95．7％。關(guān)鍵詞：三聚氰胺；LC—MS—MS；原料乳；奶粉中圖分類號：$851．34+7．5文獻標識碼：B文章編號：1004—5090(2

3、009)04—0007—03三聚氰胺(melamine)簡稱三胺，學名三氨三嗪，別名蜜1．2．2質(zhì)譜條件離子源ESI(+)；毛細管電壓3．0kV；錐胺、氰尿酰胺、三聚酰胺，是一種重要的氮雜環(huán)有機化工原孔電壓30V：離子源溫度110℃；脫溶劑氣溫度400~C；脫料

4、l_使用常用的粗蛋白測定方法“凱氏定氮法”只能測出溶劑氣流量600L／h：錐孔反吹氣流量50I／h第一重四極樣品的含氮量．不能鑒定是有機氮還是無機氮。由于三聚氰桿和第二重四極桿的低端分辨率及高端分辨率均為15V：胺無色無味，含氮比例為66％，易于生產(chǎn)和購買，成本低，添錐孔電壓和

5、碰撞能量見表2檢測方式為多反應監(jiān)測加了三聚氰胺的食品用“凱氏定氮法”可測出較高的蛋白含(MRM)掃描模式，其參數(shù)見表2。量．從感官上無法鑒別．因而常被不法分子添加進食品和動表2多反應監(jiān)測掃描模式的參數(shù)物飼料中冒充蛋白質(zhì)大量試驗研究表明．哺乳動物長期攝Parention(m／z)Dauterionm／z)Conevoltage(eV)Collisionenergy(eV)人大量的三聚氰胺會造成腎臟損傷[2,33．2007年3月發(fā)生于美國的寵物中毒死亡事件FDA調(diào)查結(jié)果認定是中國輸入的小麥蛋白粉和大米濃縮物里含有三聚氰胺．2008年9月1．

6、3溶液的配制份國內(nèi)三鹿奶粉事件的罪魁禍首也是三聚氰胺。1．3．1標準溶液的配制準確稱取三聚氰胺對照品50mg1材料與方法于50ml容量瓶中。加20％(V／V)甲醇溶液超聲溶解，放冷1．1儀器與試劑至室溫后定容．配制成含三聚氰胺1mg／ml的標準貯備WatersACQUITYUPLC超高效液相色譜儀：Waters液．4℃保存。MieromassQuattroPremierXE三重四極桿質(zhì)譜儀：配電噴霧l_3．2提取液的配制取480ml10L三氯乙酸溶液，加離子源(ESI)；Waters固相萃取裝置；梅特勒320型酸度計。入20ml22g／

7、L乙酸鉛溶液，混勻，臨用前配制。WatersOasisMCX固相萃取小柱(3ml，60mg)：三聚1．4樣品的提取氰胺對照品：乙腈、甲酸為色譜純，其余試劑均為分析純．1．4．1原料乳的提取方法準確量取2ml原料乳于50ml實驗室用一級水由Millipore—Q超純水系統(tǒng)制備。圓底離心管中，準確加入18m1提取液，渦動30s，超聲201．2儀器條件min，15000r／min離心10min，準確移取10ml上清液備用。1．2．1液相色譜條件流動相：溶劑A為乙腈．溶劑B為如果上層溶液渾濁．可用快速濾紙過濾．取10ml濾液備O．01mol／L

8、乙酸銨溶液(pH值=4．4)，梯度洗脫，洗脫程序用。見表1。柱溫3OqC，進樣量l0。1．4．2奶粉的提取方法準確稱取2g奶粉于50ml圓底表1梯度洗脫程序離心管中，準確加入20ml提取液．渦動30S。超聲20min，15000dmin離心10min．準確移取10ml上清液備用．如果上層溶液渾濁，可用快速濾紙過濾，取1Oml濾液備用1．5凈化分別用3Tl1l甲醇、3ml水活化混合型陽離子交換固相萃取柱，將1．4．1或1．4．2所得10ml提取液過柱．控制過·7·2009年(第30卷)第4期綜合版河南畜牧獸醫(yī)柱速度在1mUmin以內(nèi)。再分

9、別用3ml水和3ml甲醇洗需要選擇合適的色譜柱。該試驗在研究過程中．考察了滌混合型陽離子交換固相萃取柱．抽干后用3ml5％氨化Waters公司的ACQUITYUPLCTMBEHHILIC柱f2．1ram~甲