補腎寧心方及脫氫表雄酮防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的作用機制

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1、摘要補腎寧心方及脫氫表雄酮防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的作用機制中文摘要骨質(zhì)疏松與相關(guān)的骨折是全球性中老年婦女死亡率和致殘率升高的主要原因，隨著世界人口的老年化，骨質(zhì)疏松將成為前所未有的公共衛(wèi)生問題。雌激素撤退與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松(PMOP)有密切的關(guān)系，但激素替代治療(HRT)對于PMOP的防治作用缺乏有力的證據(jù)，而且增加了心臟疾患、中風及乳腺癌的發(fā)病率，這使HRT的應用受到了限制。目前應用的經(jīng)典抗骨質(zhì)疏松藥物，如降鈣素、二磷酸鹽、雌激素等，多為抑制破骨細胞活性的藥物，缺乏刺激成骨細胞活性或既刺激成骨又抑制破骨的藥物。因此，在深入研究和發(fā)掘化學合

2、成藥物的同時，更要注重天然植物化合物的開發(fā)研究。在補腎寧心方能有效改善臨床癥狀的基礎(chǔ)上，探討其對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的作用機制具有深遠的意義。第一部分補腎寧心方及脫氫表雄酮對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松小鼠的防治作用目的探討補腎寧心方及脫氫表雄酮防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的作用。方法建立BALB／c小鼠絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型，灌服脫氫表雄酮(DHEA組)或補腎寧心方濃縮液(BSNXD組)。以灌服17B一雌二醇組(E。組)為陽性對照，灌服生理鹽水組(Saline組)為陰性對照。手術(shù)相同但不切除卵巢小鼠為假手術(shù)對照(Sham組)。12周后處死，心臟取血制備藥物血清，測定

3、Th。／Th。型細胞因子和DHEA、DHEA—s。取椎骨(L3—4)和左股骨測定骨密度(BMD)；椎骨(L1—2)和右股骨行組織形態(tài)計量分析；右脛骨行透射電鏡觀察，測定護骨素(OPG)的mRNA表達，分析芳香化酶活性；取左脛骨分析凋亡的成骨細胞(0B)；取顱骨植塊法培養(yǎng)OB，分析oB增殖能力的變化。取子宮稱量濕重，行子宮組織切片觀察，分析芳香化酶活性及雌激素受體(ER)亞型的表達。結(jié)果BSNXD及DHEA對椎骨與股骨的8MI)、骨小梁面積均有改善作用(P0．05)。BSNXD和DH

4、EA組的DHEA、DHEA—s和IFN—Y水平明顯高于Saline組(P<0．01)，而IL一4水平低于Saline組(P

5、BSNXD和DHEA組的骨OPG、子宮ERo和ERD的轉(zhuǎn)錄水平均有顯著增加(分別為P<0．05和P<0．0i)。結(jié)論補’腎寧心方可提高外周血DHEA(一s)的水平，增強骨中芳香酶的活性。補腎寧心方及DHEA能夠防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松而對子宮無／或僅有輕微的增生作用；其作用機制與增強骨中芳香化酶及0B活性，提高骨OPG表達及調(diào)節(jié)Th。／Th。偏移有關(guān)。關(guān)鍵詞補腎寧心方：脫氫表雄酮；骨密度；形態(tài)計量；成骨細胞；IFN—Y／IL一4；芳香酶活性；子宮；ERQ／BRB；護骨素第二部分補腎寧心方藥物血清對小鼠成骨細胞的抗凋亡作用目的解析補腎寧心方對

6、成骨細胞的抗凋亡作用及其機制方法建立BALB／c小鼠絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型，給予補腎寧心方濃縮液(BSNXD組)和生理鹽水(Saline組)灌服12周后，制備藥物血清，來自Saline組的血清(空白血清)作為對照。取頭蓋骨酶解法培養(yǎng)成骨細胞(OB)，觀察藥物血清、空白血清和BSNXD濃縮液在體外對OB的抗凋亡作用。Immunoblottin&分析藥物血清對成骨細胞pERKl／2表達的影響。結(jié)果BSNXD濃縮液在5％～40％濃度范圍內(nèi)均無抑制OB凋亡的作用(P>0．05)；空白血清只在15％濃度有抗0B凋亡的作用(P

7、藥物血清在10％(PO．05)。補腎寧心方藥物血清在10％～20％的濃度范圍內(nèi)，能快速而短暫地增加成骨細胞ERKl／2的磷酸化；尤其在20％濃度時磷酸化水平最高，10分鐘時達到峰值，15分鐘后逐漸減弱。而且，藥物血清誘導的ERKl／2磷酸化可以被特異性MEKl／2(ERKl／2上游的分子)拮抗劑UOl26所抑制。結(jié)論補腎寧心方對成骨細胞的抗凋亡作用，是復方通過小鼠體內(nèi)新生的內(nèi)生性成分發(fā)揮作用。補腎寧心方藥物血清對成骨細胞的抗

8、凋亡作用是通過激活MAPK途徑介導的。摘要關(guān)鍵詞補腎寧心方；藥物血清；成骨細胞；凋亡；MAPK途徑第三部分脫氫表雄酮對小鼠成骨和破骨細胞的調(diào)節(jié)作用目的研究脫氫表雄酮(DHEA)抑制骨吸收的作用機制。方法取新生2～4天BA