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《轉(zhuǎn)錄因子IRF4在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及與其預(yù)后關(guān)系的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文轉(zhuǎn)錄因子IRF4在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及與其預(yù)后關(guān)系的研究姓名：王姣杰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：宋永平20070501鄭州大學(xué)2007屆碩士畢業(yè)論文轉(zhuǎn)錄因子IRF4在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及與其預(yù)后關(guān)系的研究種骨髓瘤相關(guān)癌基因，是干擾素調(diào)節(jié)因子家族中的成員，較其它成員特異表達(dá)于淋巴細(xì)胞。IRF4屬于轉(zhuǎn)錄因子的一種，在基因調(diào)控中起重要作用，其異常表達(dá)是由于t(6：14)(P25：q32)染色體異位，即IRF4異位到第14號(hào)染色體IgH增強(qiáng)予位點(diǎn)，導(dǎo)致MUMl蛋白過表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤形成。IRF4／MUM
2、l能促進(jìn)成纖維母細(xì)胞的轉(zhuǎn)化以及其缺失的淋巴細(xì)胞凋亡增加均提示其癌基因的范疇。既往資料表明IRF4在大多數(shù)多發(fā)性骨髓瘤患者中異常表達(dá)。近來(lái)研究報(bào)道IRF4／MUMl在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中有50％-75％的陽(yáng)性率，但其與預(yù)后的關(guān)系目前仍不能確定。為明確IRF4／MUIll與DLBcL臨床預(yù)后的關(guān)系。深入探討DLBCL的發(fā)病機(jī)制，以及尋找治療DLBCL新方法和新途徑，我們進(jìn)行了這方面的研究。研究分兩部分進(jìn)行，第一部分為臨床研究，以臨床確診的DLBCL病人為研究對(duì)象，免疫組化方法檢測(cè)IRF4的表達(dá)情況并觀察IRF4陽(yáng)性及陰性患者的生存期，探討IRF4的表
3、達(dá)與DLBcL的預(yù)后關(guān)系?第二部分為體外研究，以B淋巴瘤細(xì)胞株Namalwa和Daudi為研究對(duì)象，利用不同濃度的阿霉素聯(lián)合萬(wàn)珂(Velcade)作用于細(xì)胞株，探討轉(zhuǎn)錄因子IRF4在其中的表達(dá)及與化療藥物耐藥的關(guān)系，同時(shí)觀察蛋白酶體抑制劑Velcade對(duì)IRF4的影響，為臨床治療提供理論依據(jù)。研究對(duì)象與方法1、收集河南省腫瘤醫(yī)院和上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院2001--2005年經(jīng)病理確診的彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者及其病理臘塊標(biāo)本，患者共有95例，男性58例，女性37例；年齡18—84歲，中位年齡5l歲。免疫組織化學(xué)方法探討IRF4的表達(dá)情況，將
4、患者分為IRF4(+)組和IRF4(一)組，隨訪兩組患者，探討2年無(wú)病生存率和總生存率有無(wú)差別。2、B細(xì)胞淋巴瘤Namalwa和Daudi細(xì)胞株培養(yǎng)于含10％胎牛血清的RPMI一1640培養(yǎng)液中，置于37"C、5％C02、飽和濕度的培養(yǎng)箱，兩天傳代一次。3、四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色實(shí)驗(yàn)應(yīng)用96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔接種2×10‘個(gè)細(xì)胞于200Il1RPMll640培養(yǎng)體系中，分別加入不同濃度的阿霉素(0、5、10、20、30、50、lOOng／m1)；對(duì)于Namalwa細(xì)胞株，Velcade15nM聯(lián)合加入不同濃度的阿霉素組。每種用藥濃度設(shè)三復(fù)孔并
5、設(shè)不加藥的對(duì)照組，放置于37"C、5％C0：、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48d'時(shí)后，每孔加入5mg／mlMMT20Il1繼續(xù)培養(yǎng)64,時(shí)，取出2000轉(zhuǎn)／分離-I=l,lO分鐘，小心lI鄭州大學(xué)2007屆碩士畢業(yè)論文轉(zhuǎn)錄因子IRF4在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及與其預(yù)后關(guān)系的研究吸棄培養(yǎng)液，加入200u1DMSO，振蕩溶解后于570nm波長(zhǎng)酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的光密度值(0D)，計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率[細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=(對(duì)照組oD值一加藥組0D值)／對(duì)照組0D值】。4、AnnexinV檢測(cè)凋亡：不同濃度的阿霉素和Velcade及兩藥聯(lián)合進(jìn)行細(xì)胞凋亡刺激后，收
6、集并洗滌細(xì)胞，用AnnexinV—FITC方法標(biāo)記，隨即應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析AnnexinV—FITC標(biāo)記的待檢細(xì)胞凋亡情況。5、抽提RNA收集Daudi和Namalwa細(xì)胞株以及Namalwa細(xì)胞株不同用藥組(阿霉素50ng／m1、Velcadel5nM和兩藥聯(lián)合)、不同用藥時(shí)間(12、24、48、72d,時(shí))的細(xì)胞各3×106，常規(guī)Trizal法抽提總體RNA。分光光度儀測(cè)量RNA濃度，瓊脂糖電泳檢測(cè)RNA質(zhì)量。6、RT—PCR和半定量RT—PCR檢測(cè)IRF4的基因表達(dá)20II1體系取2．5IIg總體RNA用逆轉(zhuǎn)錄酶M-MLV合成cDNA。取2u
7、1cDNA進(jìn)行PCR反應(yīng)擴(kuò)增IRF4基因，B—globin做為對(duì)照。具體方法參照操作指南。IRF4的引物序列是57一AGAACGAGGAGAAGAGCATC一3．和5’一CcTTTAAACAGTGccC從G一3’，PCR產(chǎn)物為114bp；B—globin的引物序列是5’一TGGTCTCCTTAAACCTGTCTTG一3’和5’一ACAC從CTGTGTTCACTAGC一3’，PCR產(chǎn)物為216bp。7、Western雜交檢測(cè)IRF4蛋白表達(dá)收集Daudi和Namal霄a細(xì)胞株以及Namalwa細(xì)胞株不同用藥組(阿霉素50ng／ml、Velcadel5
8、nM和兩藥聯(lián)合)、不同用藥時(shí)間(12、24、48、72d,時(shí))的細(xì)胞3×10'，用100ll1Laemli緩沖液(62．5
