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1、第六章發(fā)酵染菌及防治發(fā)酵過(guò)程中除了生產(chǎn)菌以外,還有其它菌生長(zhǎng)繁殖,如果這些雜菌的生長(zhǎng)失控,就會(huì)造成發(fā)酵染菌。幾乎所有的發(fā)酵工業(yè),都有可能遭受雜菌的污染。染菌的結(jié)果,輕者影響產(chǎn)量或產(chǎn)品質(zhì)量,重者可能導(dǎo)致倒罐,甚至停產(chǎn)。第一節(jié)發(fā)酵過(guò)程中的染菌分析第二節(jié)發(fā)酵染菌的預(yù)防措施第三節(jié)發(fā)酵染菌后的處理第四節(jié)預(yù)防噬菌體的危害種子培養(yǎng)異常主要表現(xiàn)有菌體生長(zhǎng)緩慢、菌絲結(jié)團(tuán)、菌體老化以及培養(yǎng)液的理化參數(shù)變化。發(fā)酵異常主要表現(xiàn)在菌體生長(zhǎng)速度緩慢,形態(tài)不粗壯或過(guò)早老化,以及糖、氮、pH、泡沫、發(fā)酵產(chǎn)物、發(fā)酵濃度等理化參數(shù)不正常。一、發(fā)酵過(guò)程染菌的異?,F(xiàn)象二、染菌對(duì)發(fā)酵的影響(一)染菌對(duì)發(fā)酵過(guò)程本身的影響
2、生產(chǎn)不同的品種,可污染不同種類和性質(zhì)的微生物。放線菌由于生長(zhǎng)的最適pH為7左右,因此染細(xì)菌為多,而霉菌生長(zhǎng)pH為5左右,因此染酵母菌為多。不同污染時(shí)間,不同污染途徑,污染不同菌量,不同培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件又可產(chǎn)生不同后果。1、發(fā)酵染菌對(duì)不同產(chǎn)品的影響青霉素發(fā)酵染菌,絕大多數(shù)雜菌都能直接產(chǎn)生青霉素酶,而另一些雜菌則可被青霉素誘導(dǎo)而產(chǎn)生青霉素酶。不論在發(fā)酵前期、中期或后期,染有能產(chǎn)生青霉素酶的雜菌,都能使青霉素迅速破壞。鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、卡那霉素等雖不象青霉素發(fā)酵染菌那樣一無(wú)所得,但也會(huì)造成不同程度的危害。如雜菌大量消耗營(yíng)養(yǎng)干擾生產(chǎn)菌的正常代謝;改變pH,降低產(chǎn)量?;尹S霉素、制霉
3、菌素、克念菌素等抗生素抑制霉菌,對(duì)細(xì)菌幾乎沒(méi)有抑制和殺滅作用。對(duì)疫苗生產(chǎn)危害很大?,F(xiàn)在疫苗多采用深層培養(yǎng),這是一類不加提純而直接使用的產(chǎn)品,在其深層培養(yǎng)過(guò)程中,一旦污染雜菌,不論死菌、活菌或內(nèi)外毒素,都應(yīng)全部廢棄。因此,發(fā)酵罐容積越大,污染雜菌后的損失也越大。不同產(chǎn)品2、污染不同種類和性質(zhì)的微生物的影響(1)污染噬菌體噬菌體的感染力很強(qiáng),傳播蔓延迅速,也較防治,故危害極大。污染噬菌體后,可使發(fā)酵產(chǎn)量大幅度下降,嚴(yán)重的造成斷種,被迫停產(chǎn)。(2)污染其它雜菌有些雜菌會(huì)使生產(chǎn)菌自溶產(chǎn)生大量泡沫,即使添加消泡劑也無(wú)法控制逃液,影響發(fā)酵過(guò)程的通氣攪拌。有的雜菌會(huì)使發(fā)酵液發(fā)臭、發(fā)酸,致使p
4、H下降,使不耐酸的產(chǎn)品破壞。特別是染芽孢桿菌,由于芽孢耐熱,不易殺死,往往一次染菌后會(huì)反復(fù)染菌。青霉素發(fā)酵:污染細(xì)短產(chǎn)氣桿菌比粗大桿菌的危害大鏈霉素發(fā)酵:污染細(xì)短桿菌、假單孢桿菌和產(chǎn)氣桿菌比粗大桿菌的危害大四環(huán)素發(fā)酵:污染雙球菌、芽孢桿菌和夾膜桿菌的危害較大檸檬酸發(fā)酵:污染青霉菌肌苷、肌苷酸發(fā)酵:污染芽孢桿菌谷氨酸發(fā)酵:污染噬菌體高溫淀粉酶發(fā)酵:污染芽孢桿菌和噬菌體舉例:其他雜菌污染的影響3、不同時(shí)間染菌對(duì)發(fā)酵的影響污染時(shí)間是指用無(wú)菌檢測(cè)方法確準(zhǔn)的污染時(shí)間,不是雜菌竄入培養(yǎng)液的時(shí)間。雜菌進(jìn)入培養(yǎng)液后,需有足夠的生長(zhǎng)、繁殖的時(shí)間才能顯現(xiàn)出來(lái),顯現(xiàn)的時(shí)間又與污染菌量有關(guān)。污染的菌量
5、多,顯現(xiàn)染菌所需的時(shí)間就短,污染菌量少,顯現(xiàn)染菌的時(shí)間就長(zhǎng)。(1)種子培養(yǎng)期染菌由于接種量較小,生產(chǎn)菌生長(zhǎng)一開(kāi)始不占優(yōu)勢(shì),而且培養(yǎng)液中幾乎沒(méi)有抗生素(產(chǎn)物)或只有很少抗生素(產(chǎn)物)。因而它防御雜菌能力低,容易污染雜菌。如在此階段染菌,應(yīng)將培養(yǎng)液全部廢棄。(2)發(fā)酵前期染菌發(fā)酵前期最易染菌,且危害最大。原因發(fā)酵前期菌量不很多,與雜菌沒(méi)有競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì);且還未合成產(chǎn)物(抗生素)或產(chǎn)生很少,抵御雜菌能力弱。在這個(gè)時(shí)期要特別警惕以制止染菌的發(fā)生。染菌措施可以用降低培養(yǎng)溫度,調(diào)整補(bǔ)料量,用酸堿調(diào)pH值,縮短培養(yǎng)周期等措施予以補(bǔ)救。如果前期染菌,且培養(yǎng)基養(yǎng)料消耗不多,可以重新滅菌,補(bǔ)加一些營(yíng)養(yǎng),
6、重新接種再用。(3)發(fā)酵中期染菌發(fā)酵中期染菌會(huì)嚴(yán)重干擾產(chǎn)生菌的代謝。雜菌大量產(chǎn)酸,培養(yǎng)液pH下降;糖、氮消耗快,發(fā)酵液發(fā)粘,菌絲自溶,產(chǎn)物分泌減少或停止,有時(shí)甚至?xí)挂旬a(chǎn)生的產(chǎn)物分解。有時(shí)也會(huì)使發(fā)酵液發(fā)臭,產(chǎn)生大量泡沫。措施降溫培養(yǎng),減少補(bǔ)料,密切注意代謝變化情況。如果發(fā)酵單位到達(dá)一定水平可以提前放罐,或者抗生素生產(chǎn)中可以將高單位的發(fā)酵液輸送一部分到染菌罐,抑制雜菌。(4)發(fā)酵后期染菌發(fā)酵后期發(fā)酵液內(nèi)已積累大量的產(chǎn)物,特別是抗生素,對(duì)雜菌有一定的抑制或殺滅能力。因此如果染菌不多,對(duì)生產(chǎn)影響不大。如果染菌嚴(yán)重,又破壞性較大,可以提前放罐。(二)發(fā)酵染菌對(duì)提煉和產(chǎn)品質(zhì)量的影響1、發(fā)
7、酵染菌對(duì)過(guò)濾的影響1)對(duì)過(guò)濾的影響:菌體大多自溶;由于發(fā)酵不徹底,基質(zhì)的殘留濃度增加;發(fā)酵液的粘度加大。2)造成的后果:過(guò)濾時(shí)間拉長(zhǎng),影響設(shè)備的周轉(zhuǎn)使用;破壞生產(chǎn)平衡,大幅度降低過(guò)濾收率。污染雜菌的種類對(duì)過(guò)濾的影響程度有差異。2、發(fā)酵染菌對(duì)提煉的影響染菌發(fā)酵液中含有比正常發(fā)酵液更多的水溶性蛋白和其它雜質(zhì)。采用有機(jī)溶劑萃取的提煉工藝,則極易發(fā)生乳化,很難使水相和溶劑相分離,影響進(jìn)一步提純。采用直接用離子交換樹(shù)脂的提取工藝,會(huì)影響進(jìn)一步提純。3.發(fā)酵染菌對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響1)染菌的發(fā)酵液含有較多的