常用western blot 試劑配方

《常用western blot 試劑配方》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、Westernblot常用試劑配方1.丙烯酰胺-雙丙烯酰胺儲(chǔ)存液：30%AB（100ml）丙烯酰胺29g雙丙烯酰胺1g加蒸餾水至100ml，過(guò)濾，棕色瓶保存。2.10%SDS：（10ml）電泳級(jí)SDS1g蒸餾水9ml初始PH約為7.85，用針尖蘸少許濃鹽酸調(diào)PH至7.2，定容至10ml。3.TEMED（四甲基乙二胺）（成品）4.Lower-buffer（1.5MTris-ClPH8.8）：50mlTris-base9.085g蒸餾水45ml加濃鹽酸（約0.4ml）調(diào)PH至8.8后定容至50ml，4℃保存。5.upperbuffer（1.0MTris-Cl，PH6.8）：50mlTris-b

2、ase6.055g蒸餾水44ml加3.5ml濃鹽酸調(diào)PH至6.8后定容至50ml，4℃保存。6.10%過(guò)硫酸銨（10%AP）：0.5ml新鮮配制稱取0.05gAP于1.5mlEP管中，儲(chǔ)存于-20℃，用時(shí)溶于0.5ml蒸餾水7.5×loadingbuffer：（1ml）50mlupperbuffer0.312ml15.6ml甘油（丙三醇）0.5ml25mlSDS0.1g5gDTT0.0385g溴酚藍(lán)0.005g0.25g加蒸餾水溶解后定容至1ml。取0.2ml加0.8ml蒸餾水配成工作液。8.5×runningbuffer：（1000ml）Tris-base15.1g甘氨酸（Glycine

3、）94gSDS5g加蒸餾水溶解后定容至1000ml。用時(shí)加4000ml蒸餾水。9.考馬斯亮藍(lán)染液：100ml（可重復(fù)利用）甲醇30ml冰乙酸10ml蒸餾水60ml考馬斯亮-2500.05g10.考馬斯亮藍(lán)脫色液500ml：現(xiàn)用現(xiàn)配乙酸（10%）50ml甲醇（30%）150ml加蒸餾水定容至500ml。11.Transbuffer（PH8.5）：100ml現(xiàn)用現(xiàn)配Tris-base0.3028g甘氨酸1.4872g甲醇20ml加蒸餾水定容至100ml。12.10x麗春紅染液（儲(chǔ)存液）：（可重復(fù)利用）（用時(shí)用蒸餾水稀釋為1X的）染色后用純水脫色麗春紅??????????????????????

4、???2g三氯乙酸??????????????????????30g磺基水楊酸????????????????????30g加H2O?定容至10ml（儲(chǔ)存液）。4℃保存。用1×TBST洗脫13.10×TBS：500mlTris-base12.1gNaCl40g加濃鹽酸5ml調(diào)PH至7.6，加蒸餾水定容至500ml（儲(chǔ)存液）。4℃保存。用時(shí)蒸餾水稀釋為1×TBS（1份10×儲(chǔ)存液，9份水）.14.1×TBST（加Tween-20的TBS）洗滌液：Tween-20含量0.05%15.封閉液：含5%脫脂奶粉的TBST脫脂奶粉1g1×TBST20ml16.ECL發(fā)光底物：兩種溶液1:1混合，均勻涂

5、于膜上。17.H202配制取普通純水按照每10ml純水加入40μl30%H2O2比例配成新鮮H2O2溶液替代ECL溶液B使用