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《自己翻譯的羅氏tunel檢測(cè)細(xì)胞凋亡試劑盒說明書》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、羅氏tunel檢測(cè)細(xì)胞凋亡試劑盒說明書注意：Label溶液含有甲次砷酸鹽和二氯化鈷，嚴(yán)禁吸入和食入。反應(yīng)懸浮物收集于密閉、不易碎、有明確標(biāo)識(shí)的容器中，按有毒廢物處理。試劑盒組成：小瓶/蓋子標(biāo)簽內(nèi)容物1藍(lán)色酶溶液大腸桿菌重組牛胸腺末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶，在storagebuffer中10×conc.5×50ul2紫色標(biāo)記溶液在reactionbuffer中的核苷酸混合物1×conc.5×550ul3黃色轉(zhuǎn)化-POD抗熒光素抗體，綿羊Fab片段，連接有辣根過氧化物酶Ready-to-use3.5ml需要自己配置的
2、其他物品：除上表所列試劑外，還需準(zhǔn)備以下溶液。下表列出每步所需物品概覽：步驟設(shè)備試劑樣品準(zhǔn)備section3.2黏附細(xì)胞，細(xì)胞涂片和細(xì)胞離心涂片準(zhǔn)備section3.2.1冰凍組織section3.2.2.2Washingbuffer：磷酸緩沖液PBS*Blokingbuffer封閉緩沖液：溶于甲醇的3%H2O2Fixationsolution固定劑：溶于PBS的4%多聚甲醛，ph7.4，新鮮配制Permeabilisationsolution滲透溶液：溶于0.1%檸檬酸鈉的0.1%TritonX-100，
3、新鮮配制（6）固定劑石蠟包埋組織section3.2.2.1二甲苯和乙醇（濃度：95%，90%，80%，70%，溶于雙蒸水中）Washingbuffer：PBS*蛋白酶K*，不含核酸酶，工作濃度：[10-20ug/ml，溶于10mMTris/HCL中，ph7.4-8]替代處理方案※滲透溶液：（0.1%Triton1）X-100，溶于0.1%檸檬酸鈉的，新鮮配制※胃蛋白酶*（0.25%-0.5%，溶于鹽酸中，ph2）或胰蛋白酶*，0.01NHCL，不含核酸酶※0.1M檸檬酸緩沖液，ph6，微波照射標(biāo)記步驟se
4、ction3.3陽性對(duì)照section3.3.1微球菌核酸酶或DNaseI，重組，級(jí)別1*黏附細(xì)胞，細(xì)胞涂片和細(xì)胞離心涂片和組織section3.3.2Parafilm石蠟封口膜或蓋片濕盒Washingbuffer：PBS*Difficulttissue困難組織塑料容器微波濕盒Citratebuffer檸檬酸鹽緩沖液，0.1M，ph6.0Washingbuffer：PBS*Tris-HCL，0.1Mph7.5，含3%的BSA*和20%正常牛血清信號(hào)轉(zhuǎn)換section3.4濕盒Parafilm石蠟封口膜或蓋片
5、Washingbuffer：PBS*DABMetalEnhancedSubstrateSet*DAB金屬增強(qiáng)底物*或POD底物替代物光鏡鏡檢封固劑產(chǎn)品概述：特異性：TUNEL反應(yīng)優(yōu)先標(biāo)記凋亡產(chǎn)生的DNA鏈斷裂，從而辨別凋亡與壞死、以及由抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的藥物或放射線產(chǎn)生的primaryDNA鏈斷裂實(shí)驗(yàn)干擾：假陰性：在某些型式的凋亡細(xì)胞中DNA鏈斷裂可能缺失或不完全?？臻g位阻，如細(xì)胞外元件可能阻止TdT到達(dá)DNA斷裂處。兩種情況均能產(chǎn)生假陰性。假陽性：在壞死晚期，可能產(chǎn)生大量的DNA片段DNA鏈斷裂也可能在具有高
6、增殖和代謝活動(dòng)的細(xì)胞中出現(xiàn)。兩種情況均能產(chǎn)生假陽性。為確認(rèn)細(xì)胞死亡的凋亡型式，應(yīng)認(rèn)真進(jìn)行每種細(xì)胞的形態(tài)學(xué)檢查凋亡過程中產(chǎn)生的形態(tài)學(xué)改變尤其特征形式，因此，對(duì)于可以結(jié)果進(jìn)行解釋時(shí)，細(xì)胞形態(tài)評(píng)估是一項(xiàng)重要的參數(shù)樣本：細(xì)胞離心涂片和細(xì)胞涂片在chamberslides上培養(yǎng)的黏附細(xì)胞冰凍或福爾馬林固定、石蠟包埋樣本分析時(shí)間：2-3小時(shí)，除外培養(yǎng)、固定和滲透檢測(cè)次數(shù)：一個(gè)試劑盒50T試劑盒存儲(chǔ)/穩(wěn)定性：未開封試劑盒儲(chǔ)存于-15～-25℃可穩(wěn)定至標(biāo)簽上標(biāo)明的效期。試劑儲(chǔ)存和穩(wěn)定性TUNEL反應(yīng)混合物TUNEL反應(yīng)混合
7、物應(yīng)在用前臨時(shí)配制，不能儲(chǔ)存TUNEL反應(yīng)混合物用前應(yīng)置于冰上轉(zhuǎn)化-POD一旦融化轉(zhuǎn)化-POD溶液后，應(yīng)儲(chǔ)存于2-8℃（最長(zhǎng)穩(wěn)定6個(gè)月）注意：禁止冰凍結(jié)冰優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)特點(diǎn)靈敏在單個(gè)細(xì)胞水平檢測(cè)細(xì)胞凋亡的早期間斷特異對(duì)壞死來說，優(yōu)先標(biāo)記凋亡快速分析時(shí)間短（2-3h）簡(jiǎn)便試劑穩(wěn)定、優(yōu)化，沒有稀釋步驟靈活適合于固定細(xì)胞核組織，允許堆積、貯存和轉(zhuǎn)運(yùn)樣本雙染可以鑒定細(xì)胞凋亡的類型和階段Function-tested功能檢查對(duì)于大量的批號(hào)來說，每一批號(hào)均進(jìn)行了功能檢測(cè)步驟和所需材料：1流程圖：2樣品準(zhǔn)備2.1黏附細(xì)胞、細(xì)
8、胞涂片和細(xì)胞離心涂片需準(zhǔn)備的其他試劑：Washingbuffer：磷酸鹽緩沖液（PBS）Blockingbuffer封閉溶液：甲醇稀釋的3%H2O2Fixationsolution固定溶液：PBS配制的4%多聚甲醛，ph7.4，新鮮配制Permeabilisationsolution滲透液：0.1%Triton1）X-100溶于0.1%檸檬酸鈉溶液中，新鮮配制步驟：下表描述了細(xì)胞固定、內(nèi)源性過氧化物酶封閉和細(xì)胞滲
