TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(顯色法)

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1、TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(顯色法)產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱包裝C1091TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(顯色法)20次產(chǎn)品簡(jiǎn)介：?碧云天生產(chǎn)的顯色法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(ColorimetricTUNELApoptosisAssayKit)為您提供了一種高靈敏度又快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。對(duì)于待檢測(cè)的細(xì)胞或組織樣品，經(jīng)過(guò)生物素標(biāo)記和后續(xù)的DAB顯色等步驟，即可在普通光學(xué)顯微鏡下觀察到凋亡細(xì)胞。?細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DN

2、Aladder?；蚪MDNA斷裂時(shí)，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TerminalDeoxynucleotidylTransferase,TdT)的催化下加上生物素(Biotin)標(biāo)記的dUTP(Biotin-dUTP)，隨后和辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的Streptavidin(Streptavidin-HRP)結(jié)合，最后在HRP的催化下通過(guò)DAB顯色來(lái)顯示凋亡細(xì)胞，從而可以通過(guò)普通光學(xué)顯微鏡檢測(cè)到凋亡的細(xì)胞，這就是本試劑盒通過(guò)TUNEL(TdT-mediateddUTPNick-EndLabeling)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理。

3、?本試劑盒有如下優(yōu)點(diǎn)。(1)高靈敏度：可以在單細(xì)胞水平檢測(cè)到細(xì)胞凋亡，同時(shí)由于凋亡早期就有DNA斷裂，可以檢測(cè)到早期的細(xì)胞凋亡。(2)特異性好：TUNEL檢測(cè)時(shí)通常更容易標(biāo)記凋亡細(xì)胞，而不容易標(biāo)記壞死細(xì)胞。(3)快速：僅需約2-3個(gè)小時(shí)即可完成。(4)應(yīng)用范圍廣：可以用于檢測(cè)冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可以檢測(cè)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。?TUNEL法特異性檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)產(chǎn)生的DNA斷裂，但不會(huì)檢測(cè)出射線等誘導(dǎo)的DNA斷裂(和細(xì)胞凋亡時(shí)的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開(kāi)，另一方面也不會(huì)把射線等誘導(dǎo)發(fā)生DNA斷裂的非

4、凋亡細(xì)胞判斷為凋亡細(xì)胞。?極少數(shù)細(xì)胞凋亡時(shí)沒(méi)有DNA斷裂，此時(shí)不適用TUNEL法檢測(cè)。在個(gè)別類型的壞死細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測(cè)呈陽(yáng)性。在需要嚴(yán)格判斷細(xì)胞凋亡的情況下，最好同時(shí)檢測(cè)多個(gè)凋亡指標(biāo)。?本試劑盒足夠檢測(cè)20個(gè)樣品。包裝清單：產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱包裝C1091-1TdT酶40μlC1091-2Biotin-dUTP960μlC1091-3TdT酶稀釋液(選用)500μlC1091-4Streptavidin-HRP22μlC1091-5Streptavidin-HRP稀釋液1mlC1091-6DAB顯色液A6mlC1091-7DAB顯色液B

5、6mlC1091-8標(biāo)記反應(yīng)終止液6ml—說(shuō)明書1份保存條件：-20℃保存。DAB顯色液A和DAB顯色液B需避光保存。注意事項(xiàng)：?需自備用于洗滌細(xì)胞的PBS或HBSS，用于封片的抗熒光淬滅封片液(P0126)等適當(dāng)?shù)姆馄?，用于固定?%多聚甲醛或向碧云天訂購(gòu)免疫染色固定液(P0098)，同時(shí)需自備含0.1%TritonX-100的PBS或向碧云天訂購(gòu)免疫染色洗滌液(P0106)。需自備過(guò)氧化氫，除石蠟切片外需自備甲醇。?如果用于石蠟切片的檢測(cè)，需自備蛋白酶K和二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天訂購(gòu)。?為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴

6、一次性手套操作。使用說(shuō)明：1.對(duì)于貼壁細(xì)胞或細(xì)胞涂片：a.用PBS或HBSS洗滌1次。b.如果細(xì)胞貼得不牢，可以干燥樣品使細(xì)胞貼得更牢。c.用4%多聚甲醛或碧云天生產(chǎn)的免疫染色固定液(P0098)固定細(xì)胞30-60分鐘。d.用PBS或HBSS洗滌1次。e.加入含0.1％TritonX-100的PBS或碧云天生產(chǎn)的免疫染色洗滌液(P0106)，冰浴孵育2分鐘。f.用PBS或HBSS洗滌1次。g.在用甲醇配制的0.3%過(guò)氧化氫溶液(0.3%H2O2inMethanol)中室溫孵育20分鐘，以滅活切片內(nèi)源的過(guò)氧化物酶。隨后用PBS或HBSS洗滌3次。

7、h.轉(zhuǎn)步驟5。2.對(duì)于懸浮細(xì)胞或細(xì)胞懸液：a.收集細(xì)胞(不超過(guò)200萬(wàn)細(xì)胞)，用PBS或HBSS洗滌1次。b.涂片，使細(xì)胞粘附在載玻片上?？梢愿稍飿悠肥辜?xì)胞貼得更牢，或使用適當(dāng)?shù)恼掣皆噭?。c.用4%多聚甲醛或碧云天生產(chǎn)的免疫染色固定液(P0098)固定細(xì)胞30-60分鐘。d.用PBS或HBSS洗滌1次。e.用含0.1％TritonX-100的PBS或碧云天生產(chǎn)的免疫染色洗滌液(P0106)，冰浴孵育2分鐘。f.用PBS或HBSS洗滌1次。g.在用甲醇配制的0.3%過(guò)氧化氫溶液(0.3%H2O2inMethanol)中室溫孵育20分鐘，以滅活切片

8、內(nèi)源的過(guò)氧化物酶。隨后用PBS或HBSS洗滌3次。h.轉(zhuǎn)步驟5。3.對(duì)于石蠟切片：a.二甲苯中脫蠟5-10分鐘。換用新鮮的二甲苯，再脫蠟5-10分鐘。