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《TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測(cè)試劑盒（通用）（BIOTIN標(biāo)記POD適用于細(xì)胞.組織樣本）一TUNEL檢測(cè)原理凱基TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞在凋亡過(guò)程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況，其原理是生物素（biotin）標(biāo)記的dUTP在脫氧核糖核昔酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdTEnzyme）的作用下，可以連接到凋亡細(xì)胞中斷裂的DNA的3-0H末端，并可與連接了的辣根過(guò)氧化酶的鏈霉親和素（Streptavidin-HRP）特異結(jié)合，在辣根過(guò)氧化酶底物二氨基聯(lián)苯胺（DAB）的存在下，產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng)（呈深棕色），特異準(zhǔn)確地定位正在凋亡的細(xì)胞，因而在普通
2、顯微鏡下即可觀察和計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞；由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒(méi)有DNA的斷裂，因而沒(méi)有3'-0H形成，很少能夠被染色。本試劑盒適用于組織樣本（石蠟包埋、冰凍和超薄切片）和細(xì)胞樣本（細(xì)胞涂片）的凋亡原位檢測(cè)。二TUNEL試劑盒組分組份20assays50assays100assays儲(chǔ)心條件Equi1ibrationBuffer1.0ml2.5mL5.0mL-20°CBiotin-ll-dUTP20UL50UL100UL-20°CTdTEnzyme80uL200PL400uL-20°C50XProteinaseK40uL100uL200u
3、L-20°CStrcptavidin-HRPlOuL25uL50uL4°C避光DAB2mg5mg10mg-20°C注意事項(xiàng)1使用前請(qǐng)認(rèn)真閱讀本說(shuō)明書(shū)，提前準(zhǔn)備好相關(guān)試劑。2因本試劑盒中組分均為微量，使用前請(qǐng)離心集液。3為避免試驗(yàn)誤差.降低試劑的損耗，建議使用精密度高的進(jìn)口微量移液槍及槍頭。4TdT酶反應(yīng)液最好在使用前根據(jù)樣本數(shù)量集中配制，再分別滴加于各樣本片上，避免每個(gè)樣本單獨(dú)配制而產(chǎn)生的試劑損耗。5另因DAB為固體粉末，使用前加入適量PBS溶解，配制成20XDAB（10mg/ml）后，按下述方法顯色使用。石蠟包埋組織切片36用戶(hù)自備：二
4、甲苯.多聚甲醛.PBS.H202.TritonX-100.檸檬酸鈉.復(fù)染染液：蘇木素或甲基綠等.蓋玻片.載玻片.染色缸。三操作流程概覽說(shuō)蠟2水合*蛋白SS處理A樣本通透性的促進(jìn)“TdT81作用下Biotin■典匕與樣本DNA的標(biāo)記反應(yīng)心本試劑盒特點(diǎn)?操作簡(jiǎn)便：使用Ready-to-Use型試劑，并配有ProteinaseK和DAB。?高靈敏度：可以單一檢出初期的凋亡細(xì)胞。?高特異性：能特異性染色凋亡細(xì)胞。?快速操作：整體操作約需3小時(shí)。?用途廣泛：可應(yīng)用于組織切片、細(xì)胞樣本等。?方便觀察：使用光學(xué)顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。?高正確性：有陽(yáng)性對(duì)照
5、片的制備方法，可以確認(rèn)試劑盒的有效性四檢測(cè)樣本的預(yù)處理TUNEL檢測(cè)時(shí)樣本的預(yù)處理是試驗(yàn)的關(guān)鍵所在，本說(shuō)明書(shū)推薦的條件僅為普遍情況，用戶(hù)需根據(jù)自已的樣本材料及首次試驗(yàn)結(jié)果來(lái)調(diào)整各個(gè)條件（參照Page9},如處理時(shí)間、處理濃度等，來(lái)優(yōu)化出適合自身樣本的試驗(yàn)條件，從而做出客觀的試驗(yàn)結(jié)果。1細(xì)胞樣本的準(zhǔn)備.PBS漂洗浸入封閉液中，莖（15-25"0）封閉IlOndnA（封0}液=珈HQ］溶于甲醇）aPBS漂洗-浸入通透液中，冰上（289）2ittijiPtwwiiitojixjoo溶千ojl皎書(shū)？趣訥，宀送入標(biāo)記反應(yīng)（詳見(jiàn)Page8）a操作注意
6、事項(xiàng)：1.為防止樣本脫落，請(qǐng)使用硅烷（Silane）處理的載玻片或采用多聚賴(lài)氨酸鋪片。2.固定好的樣本可以在-20°C的70%乙醇中放貿(mào)30分鐘?一晚，以改善細(xì)胞的滲透性。3.使用PBS清洗細(xì)胞樣本時(shí)，不要直接加在細(xì)胞樣本上，以防止細(xì)胞樣本的脫落。4.進(jìn)行PBS清洗時(shí)，以5分鐘清洗3次為標(biāo)準(zhǔn)。5.固定液、PBS、封閉液、通透液、染色缸需用戶(hù)自備，請(qǐng)按上述方法配制。2石蠟組織切片的預(yù)處理*注意事項(xiàng):蛋白酶K處理的使用濃度、處理時(shí)間及溫度，都因組織的類(lèi)型不同而有所不同，需要自已摸索優(yōu)化上述條件，如有問(wèn)題，請(qǐng)根據(jù)本說(shuō)明書(shū)丹ge9的《常見(jiàn)問(wèn)題的原
7、因及推薦解決方案》來(lái)調(diào)整條件。例如：如果凋亡細(xì)胞染色較弱時(shí)，可用高濃度的ProteinaseK（400ug/ml）處理5分鐘。（本試劑盒的50XProteinaseK濃度為lmg/ml）。靈萱代才送」石蠟切片的預(yù)處理也可根據(jù)實(shí)際情況可采用下述三種替代方法之一，即蛋白酶K處理的步聚改用下述方法，其余步聚均相同：替代方法1：將脫蠟及水合好的切片浸入通透液中8-10min（通透液：0.l%TritonX-100溶于0.1%檸檬酸鈉，需新鮮配妙替代方法2：將脫蠟及水合好的切片浸入胃蛋白酶或胰蛋白酶中8-10min（胃蛋白酶：0.25%-0.5%溶
8、于HC1PH2,胰蛋白酶0.25%-0.5%溶于0.01NHC1）替代方法3:將脫蠟及水合好的切片浸入含200ml0.1M的檸檬酸緩沖液PH6的塑料盒中，置于微波爐中350W（低檔）處理5mi
