凱基TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測試劑盒

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1、凱基TUNEL細(xì)胞凋亡原位檢測試劑盒（通用）（BIOTIN標(biāo)記POD法,適用于細(xì)胞.組織樣本）使用說明書一、TUNEL制品說明凱基TUXEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒是用來檢測細(xì)胞在凋亡過程屮細(xì)胞核DNA的斷裂情況，其原理是牛物素（biotin）標(biāo)記的dUTP在脫氣核糖核甘酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdTEnzyme）的作用下，可以連接到凋亡細(xì)胞中斷裂的DNA的3-011末端,并可與連接了的辣根過氧化酶的鏈霉親和素（Streptavidin-HRP）特異結(jié)合，在辣根過氧化酶底物二氨基聯(lián)苯胺（DAB）的存在下，產(chǎn)生很強的顏色反應(yīng)（呈深棕色），特異準(zhǔn)確地定位正在凋亡的

2、細(xì)胞，因而在普通顯微鏡下即可觀察和計數(shù)凋亡細(xì)胞；由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-0H形成，很少能夠被染色。本試劑盒適用于組織樣本（石蠟包埋、冰凍和超薄切片）和細(xì)胞樣本（細(xì)胞涂片）的凋亡原位檢測。本試劑盒特點?操作簡便：使用Ready-to-Use型試劑，并配有ProteinaseK和DAB。?高靈敏度：可以單一檢出初期的凋亡細(xì)胞。?高特異性：能特異性染色凋亡細(xì)胞。?快速操作：整休操作約需3小時。?用途廣泛：可應(yīng)用于組織切片、細(xì)胞樣本等。?方便觀察：使用光學(xué)顯微鏡觀察實驗結(jié)果。?高正確性：冇陽性對照片的制備方法，可以

3、確認(rèn)試劑盒的冇效性使用注意事項1.使用前請認(rèn)真閱讀本說明書，提前準(zhǔn)備好相關(guān)試劑。2.因木試劑盒中組分均為微量，使用前請離心集液。3.為避免試驗誤差、降低試劑的損耗，建議使用精密度高的進口微量移液槍及槍頭。4.TdT反應(yīng)液最好在使用前根據(jù)樣木數(shù)量集屮配制，再分別滴加于各樣木片上，避免每個樣本單獨配制而產(chǎn)生的試劑損耗。5.為防止樣本脫落，請使用硅烷(Silane)處理的載玻片或采用多聚賴氨酸鋪片。6.固定好的樣木可以在-20°C的70%乙醇屮放置30分鐘或至過夜，以改善細(xì)胞的滲透性。7.使用PBS清洗細(xì)胞樣本吋，不耍直接加在細(xì)胞樣本上，以防止細(xì)胞樣

4、本的脫落。8.進行PBS淸洗時，以5分鐘清洗3次為標(biāo)準(zhǔn)。9.DAB為固體粉末,使用前加入PBS配制成20XDAB(10mg/ml)后，按說明書顯色使用。二、TUNEL試劑盒組分組份Cat:KGA702Cat:KGA703Cat:KGA704儲存條件20assays50assays100assaysEquilibrationBuffer1.0mL2.5mL5.0mL-20°CBiotin-ll-dUTP20uL50uL100uL-20°CTdTEnzymo80uL200nL400uL-20°C50XProteinaseK40uL100uL200u

5、L-20°CStreptcividin-I1RPIOpL25uL50uL4°C避光DAB2mg5mg10mg-20°C試劑盒以外自備儀器和試劑光學(xué)顯微鏡、37°C孵箱、微量移液器、染色濕盒、蓋玻片、載玻片、染色缸。二甲苯、多聚甲醛、PBS、H2O2、TritonX-100.檸檬酸鈉、復(fù)染染液：蘇木素或甲基綠等。三、操作流程概覽四、檢測樣本的預(yù)處理TUNEL檢測時樣木的預(yù)處理是試驗的關(guān)鍵所在，木說明書推薦的條件僅為普遍情況，用戶需根據(jù)口已的樣木材料及首次試驗結(jié)果來調(diào)整各個條件（參照Page9},如處理時間、處理濃度等，來優(yōu)化出適合自身樣本的試驗條

6、件，從而做出客觀的試驗結(jié)果。1.細(xì)胞樣本的準(zhǔn)備操作注意事項:1.為防止樣木脫落，請使用硅烷（Silano）處理的載玻片或采用多聚賴氨酸鋪片。2.使用PBS清洗細(xì)胞樣本時，不耍直接加在細(xì)胞樣本上，以防止細(xì)胞樣本的脫落。3.進行PBS清洗時，以5分鐘清洗3次為標(biāo)準(zhǔn)。4.固定液、PBS、封閉液、通透液、染色缸需用戶自備，請按上述方法配制。五、標(biāo)記和顯色反應(yīng)預(yù)處理好的樣本PBS潦洗兩次，樣本周圍用魔水紙吸干每個樣本滴加504LTdT81反應(yīng)板，加蓋股片37C璉光濕潤反應(yīng)dOniiii(TdTIHJfcSffts45U-LEquilibrationBuf

7、fer+1I^LBiotinnll-dUTP-MHLTcTTEnzyae.需新鮮配齢(陰性對照片不加TdTSt)PBS樣本周餌吸水勰干滴加5OPLStreptavidinnHRPZEfRft.加蓋玻片37C跟潤睡光反應(yīng)30min.(Strep-tavidiii-HRP工作板=0.5U-LStreptavidinrHET-l-SS?5ULPBS)操作注意事項：1.進行PBS清洗時，以5分鐘清洗3次為標(biāo)準(zhǔn)。2.PBS清洗后，為了各種反應(yīng)的冇效進行，請盡量除去PBS溶液后再進行下一步反應(yīng)3.在載玻片上的樣木上加上實驗用反應(yīng)液后，請蓋上蓋玻片或保鮮膜，

8、或在濕盒中進行，這樣可以使反應(yīng)液均勻分布于樣本整體，又可以防止反應(yīng)液干燥造成實驗失敗。4.TdT酶反應(yīng)液即用即配，短暫于冰上保存。不宜長期保存，長期保