發(fā)酵崗位標準操作規(guī)程

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1、SOP-P-IF-003-03共3頁第3頁生物工程股份有限公司發(fā)酵崗位標準操作規(guī)程文件編號共3頁第1頁頒發(fā)部門制定人制定日期年月日審核人審核日期年月日批準人批準日期年月日生效日期年月日分發(fā)部門1.目的建立GM-CSF工程菌發(fā)酵崗位標準操作規(guī)程。2.范圍實用與GM-CSF工程菌從二級種子培養(yǎng)液上罐、發(fā)酵、離心收菌的操作。3.職責發(fā)酵崗位操作人員、車間負責人及QA生產區(qū)檢查員對本規(guī)程實施負責。4.規(guī)程4.1.生產前的準備：4.4.1.根據生產指令開出領料單。領取時，核對物料名稱、數(shù)量、批號、有效期等，然后將其送到傳遞窗。4.1.2.崗位生產操作人員按《進出十萬級潔凈區(qū)更衣標準操作規(guī)

2、程》進行更衣，然后進入崗位。4.1.3.崗位生產操作人員檢查設備、設施完好性，設備、容器、工具、室內衛(wèi)生是否有清潔合格證，清潔合格證是否在有效期內，如不合格按其清潔標準操作規(guī)程重新清潔。4.2操作方法4.2.1培養(yǎng)基配制LB培養(yǎng)基按比例配制（100L）蛋白胨16g/LSOP-P-IF-003-03共3頁第3頁酵母粉10g/L氯化鈉5g/L4.2.3實罐滅菌4.2.3.1按《BI0SATA-D型發(fā)酵罐標準操作規(guī)程》將配制好的培養(yǎng)基加入到發(fā)酵罐中,加入5ml消泡劑,121℃、30min滅菌。設定攪拌速度為150rpm左右，保證培養(yǎng)基加熱均勻。4.2.3.2滅菌時當溫度升至121℃時

3、，打開DO電極電源，設定DO電極零點。當滅菌溫度降至30℃時，設定DO電極百點。4.3上罐4.3.1調節(jié)通氣量到15L/min，攪拌速度為150rpm，穩(wěn)定3分鐘后設定DO電極100%。4.3.2調節(jié)通氣量，使罐內保持正壓。4.3.3通過接種管道從種子管向發(fā)酵罐中打入二級種子液，整個過程注意無菌操作。4.3.4取樣測OD600值。4.4培養(yǎng)4.4.1上罐后，設定通氣量為10L/min、攪拌速度為150rpm、溫度為30℃，開始培養(yǎng)。4.4.2培養(yǎng)過程中，注意DO值和pH值的變化，調節(jié)通氣量和攪拌速度使DO值為40%。4.4.3每隔1小時取樣測量OD600值。取樣前后取樣管用純蒸

4、汽流通滅菌10分鐘。做好生產記錄。4.4.4生產過程中，注意及時用蘸有0.1%新潔爾滅溶液的抹布擦去灑落在不銹鋼罐體表面及地面的液體,維持發(fā)酵罐清潔和生產車間的整潔。4.4.5誘導4.4.5.1培養(yǎng)8-10小時后，OD600為2左右時，將溫度在3分鐘內升高至42℃，繼續(xù)培養(yǎng)4小時。4.4.5.2培養(yǎng)過程中，注意DO值和pH值的變化，調節(jié)通氣量和攪拌速度使DO值為35%。4.4.6收菌4.4.6.1誘導培養(yǎng)4小時后，OD600值為5-6，取1ml菌液檢測。SOP-P-IF-003-03共3頁第3頁4.4.6.2降低攪拌速度為120rpm、通氣量為10L/min。4.4.6.3連接

5、發(fā)酵罐和離心機之間的軟管。4.4.6.4按《Z61型管式離心機標準操作規(guī)程》安裝離心機，確認安裝正確后，試啟動離心機，確認無異常聲音。4.4.6.5待轉速達到恒定后，打開發(fā)酵罐下料閥，發(fā)酵液在壓力的推動下進入離心機，離心收菌。4.4.6.6調節(jié)下料閥，控制發(fā)酵液的流出速度，使上清液的OD600<0.1。4.4.6.7收菌完畢后，上清液重新泵入發(fā)酵罐中，經過121滅菌30分鐘后排放。4.4.6.8菌體離心后裝入滅菌后的不銹剛容器內稱重，-20℃凍存。4.5.清場：4.5.1.每次操作完成后，按照《清場標準操作規(guī)程》和《發(fā)酵罐清潔標準操作規(guī)程》進行清場、清潔。4.5.2.清場結束后

6、填寫清場及清潔記錄,并由QA檢查員檢查確認清場合格后,貼掛《清潔合格》標志。4.6物料平衡的計算按《物料平衡管理規(guī)程》計算。4.7注意事項4.7.1發(fā)酵罐長期不用時，應卸下電極，將pH、DO電極放入電極液中進行保養(yǎng)。同時對罐體進行徹底的清洗，加入約30升去離子水，滅菌一次，將水放掉。4.7.2發(fā)酵罐更換菌種發(fā)酵時，應對罐體進行徹底的清洗，加入約30升去離子水，滅菌一次，將水放掉。進行新菌種發(fā)酵。4.7.3使用過程中，注意檢查pH、DO電極平衡液的情況，按照電極說明書及時補充電極平衡液。4.7.4.崗位操作人員在生產操作過程中發(fā)現(xiàn)異常情況按《緊急情況處理管理制度》處理。