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《CTC循環(huán)腫瘤細胞》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、腫瘤循環(huán)細胞（CTC）檢測行業(yè)背景中國腫瘤發(fā)病率285.91/10萬，每年新發(fā)病例321萬，6人/分鐘確診惡性腫瘤。腫瘤13標:中晚期蛋白標記物，PSA,CA125,CA199等。影像學(xué)檢測：CT，MRI,PET，僅檢出5mm以上腫瘤。病理診斷：穿刺樣本檢測，創(chuàng)傷性。技術(shù)瓶頸：僅能檢測中晚期腫瘤、難以早期診斷！液體活檢：通過檢測血液及其他體液中更加特異的腫瘤指紋來實現(xiàn)腫瘤早期診斷。循環(huán)腫瘤細胞（CTC）：腫瘤上脫落的活細胞，可能代表了轉(zhuǎn)移的種子；循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）則是來自死細胞的遺傳物質(zhì)，通常以DNA短片段的形式存在。循環(huán)腫瘤細胞，circulating
2、tumorcell，CTC1896年在患者外周血中發(fā)現(xiàn)與原發(fā)腫瘤細胞體積和形態(tài)相似的細胞目前CTCs定義為自發(fā)或因診療操作脫離實體瘤原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶進入外周血循環(huán)的腫瘤細胞在腫瘤轉(zhuǎn)移灶形成前即可在外周血中檢測到循環(huán)腫瘤細胞腫瘤循環(huán)細胞的特性稀有性：每ml血液約107個白細胞中僅有1個CTC非典型形態(tài)：比血液細胞、正常組織細胞的體積大、細胞核大，不規(guī)則，核質(zhì)比高、不容易發(fā)生形變異質(zhì)性：細胞表面抗原標志物表達差異、攜帶不同的分子信息、轉(zhuǎn)移潛力差異易聚集成團CTM：成瘤遷移能力是CTC的23-50倍外周血細胞的遮蔽阻礙了它們的分離與分子鑒定，因此ＣＴＣ的檢測是制約其臨床應(yīng)
3、用的關(guān)鍵循環(huán)腫瘤細胞的概念與特性循環(huán)腫瘤細胞的特性CTCs可以是間質(zhì)型、上皮型、上皮間質(zhì)混合型、成團的CTCs(CTM)CTCs檢測的臨床可行性實時方便及時準確微創(chuàng)健康狀態(tài)癌前病變惡性腫瘤腫瘤轉(zhuǎn)移CTC檢測臨床意義CTC監(jiān)測分析耐藥性檢測動態(tài)跟蹤CTC數(shù)目，判斷是否產(chǎn)生耐藥性腫瘤復(fù)發(fā)檢測CTC數(shù)目增多是腫瘤復(fù)發(fā)的前兆腫瘤新藥物的開發(fā)配合研制新的抗腫瘤藥物體外早期診斷腫瘤在1mm時，血液中可檢測出CTC預(yù)后判斷根據(jù)治療前后CTC個數(shù)判斷預(yù)后及存活時間化療藥物的療效評判根據(jù)化療前后CTC數(shù)目變化，確定藥物是否有效如何檢測CTCs？由于外周血中CTC非常稀少，通常CTC
4、檢測會首先利用細胞的物理性質(zhì)或生物特性等對CTC加以分離富集。CTCs的富集：如何獲取CTCs？※從紅細胞和白細胞中富集惡性腫瘤細胞CTCs的鑒定：如何鑒定所獲細胞為CTCs？※將惡性腫瘤細胞與紅細胞、白細胞、正常上皮細胞、造血干細胞等區(qū)分開來循環(huán)腫瘤細胞的檢測對于分離富集的CTC可以進行基因型或者表型分析等以計數(shù)CTC或者鑒定其分子特性免疫表型分析：靶細胞丟失PCR分析：高效率，高靈敏度，特異性，操作簡單。假陽性率較高、細胞形態(tài)學(xué)被破壞、需要更嚴格的標本保存條件和實驗條件單個CTC分子信息監(jiān)測（克服白細胞污染）循環(huán)腫瘤細胞的分析鑒定循環(huán)腫瘤細胞的分離富集CTCs
5、分離、分型、分析原理技術(shù)產(chǎn)品免疫捕獲法(根據(jù)細胞表面標志物)陽性富集法：CellsearchTM系統(tǒng)CTC芯片（CTC-chip）MACS?CellSeparation陰性篩選法：EasySepCyttel過濾法(根據(jù)細胞大小)ISET膜過濾密度梯度離心（根據(jù)細胞密度）OncoQuick分離體系CTCs的檢測方法及代表技術(shù)產(chǎn)品免疫捕獲法——磁珠分選原理：將特異性抗原包被在已有同源二抗的磁珠上制成免疫磁珠再與靶細胞上抗抗原結(jié)合成“靶細胞—抗原抗體—磁珠”復(fù)合物，在磁場作用下向一定方向移動，從而富集靶細胞.分選策略陽性富集：使用表面耦聯(lián)抗目的細胞抗體的磁珠，細胞與磁珠
6、結(jié)合后直接在磁場中被分離出來。負性篩選：通過去除無關(guān)細胞使目的細胞得以純化陽性富集CellsearchTM系統(tǒng)CTC芯片（CTC-chip）MACS?CellSeparation磁性細胞分選系統(tǒng)原理：采用抗EpCAM（CD326）結(jié)合免疫磁珠捕獲EpCAM陽性CTCs特點：捕獲的CTCs純度較高能夠捕獲到血液中上皮型、上皮間質(zhì)混合型的CTCs無法捕獲到間質(zhì)型CTCs（EpCAM陰性）magnetAnti-EpCAMCoatedferrofluids7.5mlAnti-CK(epithelialcells)Anti-CD45(WBCs)DAPI(viablecell
7、s)Automatedfluorescencedetectionsystemmagnet使用抗EpCAM抗體抗體包被磁微粒，使其與腫瘤細胞結(jié)合，在特定磁場作用下達到分離CTC的目的。陽性富集-CellsearchTMCTCWBCCellsearchTMCTCs鑒定上皮來源的CTCs的判定：DAPI（細胞核）陽性、角蛋白CKs陽性、CD45陰性芯片的表層排布了78000個包被抗EpCAM抗體的微位點血液樣本流經(jīng)芯片時，抗體與腫瘤細胞結(jié)合粘附在芯片上制造相對困難，成本昂貴，顯微位點周圍的血流通暢性限制了與抗體覆蓋位點接觸的CTC數(shù)量陽性富集-CTCs-Chip原理：聯(lián)
8、合上皮細胞
