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《金龜子綠僵菌液體深層培養(yǎng)探究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、金龜子綠僵支體深層培養(yǎng)探究摘要對金龜子綠僵菌30103菌株在不同濃度吐溫80.不同維生素液體培養(yǎng)基中進(jìn)行液體深層培養(yǎng)研究，結(jié)果表明：不同濃度吐溫80對液生分生鞄子的產(chǎn)量影響顯著，培養(yǎng)基中吐溫80含量在0.6%~1?0%時，可獲最大產(chǎn)匏量；不同維生素對生物量和液生分生抱子的產(chǎn)量影響顯著，在培養(yǎng)基中添加適宜維生素能有效刺激液生分生抱子的形成，復(fù)合維生素、B2B1B6.B6B1H能使綠僵菌獲得較高的液生分生抱子產(chǎn)量。關(guān)鍵詞金龜子綠僵菌；液生芽翹子；液生分生翹子；生物量中圖分類號S476.12文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號1007-5739(2013)08-008
2、8-02綠僵菌在液體深層培養(yǎng)中某些菌株能以微循環(huán)產(chǎn)鞄方式,即不經(jīng)營養(yǎng)生長階段，直接從液生芽抱子上形成液生分生抱子[1-2]o這種產(chǎn)電現(xiàn)象的發(fā)生與培養(yǎng)液的成分和條件密切相關(guān)，該文研究在液體培養(yǎng)基中不同濃度吐溫80、不同維生素影響綠僵菌的微循環(huán)產(chǎn)抱進(jìn)程。1材料與方法1.1試驗材料1.1.1竝株。金龜子綠韁菌(Metarrhizziumanisopliae)30103o1.1.2培養(yǎng)液成分。①不同培養(yǎng)時間的培養(yǎng)液成分。碳素:蔗糖(25g/L),氮源:花生餅粉(15g/L),基礎(chǔ)鹽:KH2PO4(1.5g/LXMgSO4-7H2O(0.5g/LXCaCI
3、2(0.01g/L),微量元素：H3BO3(0.03mg/LXNa2MoO4-2H2O(0.05mg/L)、CuSO4-5H2O(0.08mg/L)、FeCI3-6H2O(0.5mg/L)，維生素:B1(15pg/gB6(100pg/gH(15pg/g),pH值6.5，吐溫80濃度0.6%。②不同濃度吐溫培養(yǎng)液成分。碳素：蔗糖(25g/L)，氮源：花生餅粉(15g/L),基礎(chǔ)鹽：KH2PO4(1.5g/LMgSO4?7H2O(0.5g/LCaCI2(0.01g/L),微量元素：H3BO3(0.03mg/LNa2MoO4-2H2O(0.0
4、5mg/LCuSO4-5H2O(0.08mg/LFeCI3-6H2O(0.5mg/L),維生素：B1(15pg/g>B6(100pg/gH(15pg/g),pH值6.5,吐溫80濃度：0、0.05%、0.10%.0.20%,0.40%、0.60%、0.80%、1.00%,1.20%,1.40%o③不同維生素培養(yǎng)液成分。碳素：蔗糖(25g/L)，氮源：花生餅粉(15g/L),基礎(chǔ)鹽：KH2PO4(1.5mg/L)、MgSO4-7H2O(0.5mg/LCaCI2(0.01mg/L)，微量元素：H3BO3(0.03mg/L)、Na2MoO4-2
5、H2O(0.05mg/L)、CuSO4-5H2O(0.08mg/LFeCI3-6H2O(0.5mg/L),維生素:B1(15pg/gXB6(100pg/gXH(15pg/g),pH值6.5，吐溫80濃度0.6%o維生素（15pg/g）:B1.B2、B6、C、H、B4、右旋泛酸鈣、復(fù)合維生素、B2B1.B2B6、B6B4.B6右旋泛酸鈣、B2B1C.B1B2B6.B2CH.B2B4右旋泛酸鈣、B6B1C.B6B1H.B6CH、B6B4右旋泛酸鈣、B2C、B2H、B6BKB6H。1.2接種培養(yǎng)1.2.1接種懸浮液制備。取供試斜面菌種分別加入含0.0
6、5%吐溫80無菌水，用無菌操作的方法打散混勻，稀釋并用血球計數(shù)板準(zhǔn)確測定其含翹量達(dá)1x106個/mL用250mL的三角燒瓶裝入49mL培養(yǎng)液滅菌入1mL抱子懸浮液,接種量為1x106個，設(shè)3次重復(fù)，恒溫?fù)u床培養(yǎng)，溫度為（25±1）°C,振蕩頻率130r/min[3-4]01.2.2觀察測定。接種后每隔12h用無菌吸管取樣觀察生長情況，有液生抱子出現(xiàn)且用血球計數(shù)板計數(shù)時進(jìn)行計數(shù)（個/mL），生物量用于物質(zhì)稱量法測定（培養(yǎng)液過濾,120°C烘箱烘干2h后稱重）[5-6]。2結(jié)果與分析2.1液體產(chǎn)物形成過程和形態(tài)振蕩培養(yǎng)24h,電子開始萌發(fā)，原生質(zhì)轉(zhuǎn)移
7、到芽管生長點，芽管自抱子一端或二端或四周均有伸出。48h菌體呈網(wǎng)狀，形成黃色菌團或散生。60h菌體出現(xiàn)產(chǎn)鞄結(jié)構(gòu)，開始形成液生芽匏子，芽匏子呈長卵形。72h后芽砲子大量形成,部分芽鞄子以微循環(huán)產(chǎn)鞄方式，直接從芽鞄子上形成分生鞄子,液生分生抱子卵球形，與氣生分生翹子有明顯差異，此后液生分生抱子產(chǎn)量逐漸增加，120-144h達(dá)到最高產(chǎn)量。2.2不同濃度吐溫80對生物量、液生抱子形成的影響表2為不同濃度吐溫80培養(yǎng)液振蕩培養(yǎng)144h后生物量及液生分生鞄子產(chǎn)鞄情況。經(jīng)方差分析可知，吐溫80對生物量影響不顯著，F(xiàn)=0?54F0?01(9,20)=3.46。吐
8、溫80對液生分生抱子的產(chǎn)量影響極顯著，F(xiàn)=6.28>F0.01(9,20)=3.46，培養(yǎng)基中吐溫含量在0.6%~1.0%日寸，有利于綠
