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《liss在間接抗人球蛋白試驗中的技術細節(jié)探討》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在應用文檔-天天文庫。
1、LISS在間接抗人球蛋白試驗中的技術細節(jié)探討 打L原和抗體反應的影響因素較多，低離子強度溶液(LISS)可減少紅細胞周圍的陽離子，增加抗原、抗體間的靜電引力，加快抗體與抗原的結合速度，因此可以縮短檢出大多數(shù)打L體的孵育時間。現(xiàn)以IgU抗-D為例，就LISS在間接抗人球蛋自試驗(lAT)中的技術細節(jié)進行相應探討，現(xiàn)報道如下。 1材料與方法 1.1材料與儀器上海血液中心國家參比實驗室的人源抗-D抗體(1gU型批弓20120823)，多特異抗人球蛋自試劑(批弓20120228)}D抗原}H性的篩選譜細胞(批號20130316，微柱凝膠卡購自瑞士達亞美公司(批弓50531.72.501/201
2、3.12),濃度為0.03mol/I.低離子強度溶液和新鮮O型D抗原陽性的紅細胞由木科室自備，凝膠卡溫浴和專用離心機為瑞士達亞美公司產(chǎn)品，離心機為日木久保田公司產(chǎn)品?！ ?.2方法 1.2.1人源抗-D血清最佳稀釋度選擇取試答8支，分別標注2}-256共8個稀釋度，使用新鮮AY型血清做稀釋基質(zhì)，第1支試r加入100pI.人源抗-D,倍比稀釋至第8r注:32倍稀釋r后更換槍頭以避免攜帶影響)，其終容積均為100pL0然后在上述每個試答中加入D抗原陽性的且5篩選細胞50u1-,I勻置于37C水浴箱溫浴30min后取出，用生l}鹽水洗滌紅細胞3次，去上清液，加入1滴多特異抗人球蛋自試劑搖勻，3X
3、00r/min離心15，結果泉示，本批次人源抗-D血清在1:16稀釋度處最先出現(xiàn)2+凝集，故選1:16稀釋比例作為后續(xù)試驗的工作液?！ ?.2.2L1SS液在間接抗人球蛋自試驗中的應用取試答12支分成2排分別標注2h,1h,30min,10min,5min,0min,最先在2hr中加入100pI.上述標化抗-D血清和50pI.2號篩選D抗原陽性的譜細胞，-答加入2滴LISS液，另一答不加LISS液搖勻后放入37C水浴箱溫浴2h，相隔1h,30min,20min,10min,5min后分別進行相同操作，6管在同一時刻到達各自的溫浴時間，均用生理鹽水進行3次洗滌，去上清液后加入多特異抗人球蛋自試
4、劑1滴，搖勻后3400r/min離心15s,觀察并記錄各個溫浴時間點加LISS液和不加LISS液所對應的凝集強度。 1.2.3LISS液在微柱凝膠卡檢測中的應用將1:16稀釋度的人源IgU抗-D血清重新稀釋為128-4096共6種稀釋度備用，將新鮮O型D抗原陽性的紅細胞獻血員標木用生理鹽水進行3次洗滌后取壓積紅細胞分別用生理鹽水和LISS液配制為3%的紅懸液備用。取2張凝膠卡每孔柱卜面分別標注128-4096，三卡分別再編1,2弓。在1弓凝膠卡每孔加入20pI.3%鹽水稀釋的紅細胞懸液，再分別加入90uI.相應稀釋度的抗-D血清;在25凝膠卡的每孔分別加入20uL300LISS液稀釋的紅細
5、胞懸液。所有孔均加入90uI.相應稀釋度的抗-D血清。將2張凝膠卡一同孵育15min后離心觀察結果?！ ?結果 2.1lAT試驗在鹽水介質(zhì)和LISS介質(zhì)在不同孵育時間點的凝集強度結果見表1?！ ?.2在鹽水介質(zhì)和LISS介質(zhì)卜微柱凝膠卡凝集強度觀察結果見表2 3討論 打L原(尤其是紅細胞類顆?？乖?抗體結合出現(xiàn)凝集反應分2個步驟，第1步抗原抗體形成復合物，第2步形成晶格(可見的凝集)。因為抗原抗體分子大多是膠體粒子，而在反應體系pH大多高于其等電點，故抗原抗體的顆粒均帶負電荷，與溶液中氧離子等形成雙電層。當在第1步抗原抗體復合物形成時離子強度越低，可減少紅細胞周圍的陽離子云，同時增加抗
6、原、抗體間的靜電引力，其反應的平衡常數(shù)K值增大，從而加快了反應速度?！ ∽?976年Moorc將LISS應用于紅細胞抗體篩選試驗以來，目前LISS在國內(nèi)臨床輸血實驗室廣泛使用，不同的實驗目的所選用的抗體篩選方法有所不同。本文以抗-D抗體(IgU型)為例，使用濃度為0.03mol/I.低離子強度溶液，探討了其在IAT,凝膠微柱法中的一此技術細節(jié)?！ ”?結果泉示，LISS可以明泉加快抗體致敏到細胞表面的速度,0.03mol/I.LISS液10min致敏效果和鹽水介質(zhì)的60mm致敏效果相當，而生理鹽水的離子強度值在0.15mol/L,在1h內(nèi)抗體致敏量隨時間的推移而增加，但超過60min后抗體的
7、致敏量并不增加，反而有減少的趨勢。在經(jīng)典抗人球試驗中，每個試答加入2滴LISS液可以減少孵育時間，提高抗體檢測效率，這對于臨床保證快速、安全的輸血，尤其是急診搶救用血有重要意義。另外通過孵育時間梯度試驗證實，在進行抗人球蛋自實驗室無論是鹽水1A'h還是LISS介質(zhì)，1A'h孵育時間都不要超過1h,孵育時間過長反而會影響抗體致敏到紅細胞上，其凝集強度反而降低，具體的機制仍需進一步研究證實。 表
